Р. Т. Маннапова

Управление механизмами становления и развития иммунитета и микробиоценоза перепелов

Учебное пособие

ebooks@prospekt.org

Информация о книге

УДК 636.5/.6(075.8)

ББК 46.8я73

М23

Автор:
Маннапова Р. Т., доктор биологических наук, профессор кафедры микробиологии и иммунологии Российского государственного аграрного университета – Московской сельскохозяйственной академии им. К. А. Тимирязева.

Прекрасной альтернативой в решении продовольственной программы классическому птицеводству служит разведение перепелов. Перепелиные яйца и мясо являются диетическими.

В настоящей книге описаны результаты многолетних экспериментальных научных исследований по изучению влияния экстракта пчелиного подмора (ЭПП) на организм перепелов. Представлены данные о влиянии разных доз ЭПП на гематологические, биохимические, физиологические показатели, факторы естественной резистентности и фагоцитоза; на формирование зрелых ростков иммунокомпетентных клеток в красном костном мозге, морфофункциональные реакции в иммунокомпетентных структурах сумки Фабрициуса, тимуса, селезенки; на осуществление ассоциативного симбиоза в мышечном и железистом отделах желудка; на колонизационную резистентность, осуществляемую доминантными и ассоциативными микросимбионтами в тонком и толстом отделах кишечника. Для повышения сохранности поголовья, прироста живой массы перепелов, улучшения биохимических показателей качества мяса и яиц предложена эффективная схема применения ЭПП при разведении перепелов в хозяйствах разного уровня и направления развития, а также в частном секторе как средства, обладающего разносторонними биологическими свойствами.

В материалах, представленных в пособии, можно найти ответы на многие вопросы студентам, начинающим и занимающимся промышленным разведением перепелов специалистам, ветеринарным и зооинженерным работникам, биологам, апитерапевтам. Книга будет интересна широкому кругу читателей, увлекающихся вопросами биологии, птицеводства, проблемами иммунитета и микросимбиоценоза и их значимости для животных и птиц.

В оформлении обложки использованы изображения из архива автора.

УДК 636.5/.6(075.8)

ББК 46.8я73

© Маннапова Р. Т., 2021

© ООО «Проспект», 2021

ПРЕДИСЛОВИЕ

Большое внимание исследователей привлекает подмор пчел. В нем присутствуют компоненты меда, маточного молочка, пыльцы, яда, прополиса, воска, что определяет его разнообразный богатый химический состав и биологическую активность. В хитозановом комплексе хитинового покрова присутствуют: гепарин, глюкозамины, меланин, пчелиный яд, уксусная кислота. Водорастворимый полимер меланин поглощает различные радикалы и служит сильнейшим антиоксидантом, генным и фотопротектором, антимутагеном. В пчелином подморе обнаружены: 27 микроэлементов (в том числе Ca, Cr, Al, Cu, Mg, P, Zn, Si, Ag, Мо, Fe), витамины (Е, К, D, P, С), белки, аминокислоты, пищевые волокна, жир (Д. В. Герасименко, 2005; Н. В. Погарская, 2008; Л. Р. Алиева, 2010; А. В. Бакулин, 2011; Л. А. Скребнева, 2012; Ф. Ф. Шарнина, 2012; Г. В. Кашина 2014; I. I. Asarko, 2009, 2010; A. V. Bakulin, 2011).

Исследования пчелиного подмора в основном касаются применения его при разных патологических состояниях в медицине, в косметологии, биотехнологии. Благодаря уникальному химическому составу предложено применение его в виде настоек, экстрактов, мазей, порошка и в нативном высушенном виде (З. К. Берикашвили, 2009, 2010; Н. И. Шрам, 2014; О. В. Алексеева, 2015; Л. А. Салтыкова, 2018; Д.В Митрофанова, 2018; R. Patil, 2015; N. S. Sambudi, 2015). Антибактериальные свойства в отношении C.albicans, S.aureus, Kl.pneumoniae описаны в работах А. И. Албулова (2004), Н. В. Погарской (2008), М. И. Селионовой (2010) и др. На мышах, крысах установлено стимулирующее действие пчелиного подмора на гематологические показатели, на сердечную и скелетную мускулатуру, выносливость при предельной физической нагрузке, в условиях недостатка кислорода и избытка углекислого газа (Н. В. Погарская, 2008; Е. А. Дунаева, Д. А. Арешидзе, 2009; М. И. Селионова, 2010; Д. В. Бакулин с соавт., 2011).

Исследования перепелов являются достаточно обширными. Они касаются вопросов роста и развития, воспроизводства, повышения мясной продуктивности, яйценоскости, улучшения кормления и содержания, влияния разных биологических добавок на организм птиц, генетического потенциала продуктивных признаков и др. (Л. И. Лисунова, 2006; З. И. Кочетова, 2006; Г. Д. Афанасьев, 2006, 2013, 2014, 2015; А. В. Макарова, 2007; В. И. Фисинин, 2010; М. Ю. Сычева, 2010; Л. Г. Коршунова, 2011, 2016; И. А. Алексеев, 2011; Г. В. Кобыляцкий, 2013; С. В. Хусид, 2015; Е. В. Толпышева, 2016; Р. Б. Тимираева, 2016). Работы Е. А. Мансуровой (2009), Е. М. Ленченко (2012) посвящены изучению гематологических, биохимических и морфометрических изменений в организме на фоне экспериментального эшерихиоза у перепелов.

Однако в литературе отсутствуют комплексные исследования по изучению влияния пчелиного подмора на организм животных и птиц, в частности на организм перепелов.

В этой связи целью исследования, представленного в монографии, явилось — изучение влияния разных доз экстракта пчелиного подмора (ЭПП) на состояние гемо- и лейкопоэза, становление и развитие механизмов иммунного ответа, микроэкологического гомеостаза желудочно-кишечного тракта и продуктивные показатели перепелов.

В монографии представлены исследования влияния разных доз ЭПП на гематологические показатели с сравнительной оценкой гемо- и лейкопоэза в организме перепелов, факторы естественной резистентности и на фагоцитоз; изучено их действие на динамику формирования зрелых ростков иммунокомпетентных клеток в красном костном мозге, на морфофункциональные реакции в иммунокомпетентных структурных компонентах сумки Фабрициуса и тимуса перепелов, а также в иммунокомпетентных структурах селезенки с учетом динамики иммуноцитологических реакций. Установлена степень влияния разных доз ЭПП на динамику взаимодействий автохтонной микрофлоры в осуществлении ассоциативного симбиоза в мышечном и железистом отделах желудка перепелов и на колонизационную резистентность, осуществляемую доминантными и ассоциативными микросимбионтами в тонком и толстом отделах кишечника перепелов. Определено влияние разных доз ЭПП на биохимические показатели качества мяса, продуктивность и сохранность перепелов.

Разработана эффективная схема применения ЭПП для повышения сохранности поголовья и прироста живой массы перепелов, для улучшения биохимических показателей качества мяса.

Полученные результаты исследований уточняют и дополняют литературные сведения по научному обоснованию применения пчелиного подмора в ветеринарии, биологии и медицине. На основании полученных данных о влиянии ЭПП на показатели гемо- и эритропоэза, естественной резистентности, фагоцитоза, иммунного статуса, естественного микробиоценоза желудочно-кишечного тракта теоретически и практически обоснована необходимость применения в перепеловодстве ЭПП, как средства, обладающего гемостимулирующими и иммуностимулирующими свойствами, способствующими созданию в организме перепелов прочного иммунного баланса, восстановлению микробной ассоциации мышечного и железистого отделов желудка, колонизационной резистентности тонкого и толстого отделов кишечника. Полученные результаты позволяют рекомендовать применение пчелиного подмора промышленному и частному перепеловодству, как эффективные средства для стимуляции роста и развития, повышения и улучшения качества перепелиного мяса и яиц.

Глава 1.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Биологические особенности перепелов

Перепеловодство хорошо окупается. Перепелки скороспелые. Цикл от закладки яиц в инкубатор до появления перепелки составляет 52–66. дней. В 10 дней перепелка начинает менять перо, в 25 — оперяется, в 30 — становится взрослой, в 40–45 дней начинает откладывать яйца. Затраты корма для получения 1 кг мяса составляют 3,5–3,6 кг, 1 кг яичной массы — 2,6 кг. Соотношение массы снесенных яиц перепелкой за год в 24 раза превышает массу тела, тогда как у кур это соотношение 1:8. Способ содержания перепелов — клеточный. Они достаточно устойчивы к инфекционным заболеваниям. Также устойчивы к микробам и перепелиные яйца, что позволяет их длительно хранить. В перепелиных яйцах большое содержание калия, фосфора, железа, витаминов В1 и В2. Перепелиное мясо сочное, нежное и считается диетическим. Перепелки несут яйца после полудня, поздно вечером, иногда ночью с интервалом примерно до 30 часов. Оплодотворенность достигает 70–85%; выводимость происходит на 17–18-й день и достигает 80–95%. Сохранность в первый месяц составляет 90–95%, во второй — до 98%. Живут перепела в клетке до 10 лет. За год от перепелов получают 5 и более поколений. Сегодня насчитывается 34 линии перепелов с различными мутациями (белая окраска яичной скорлупы, разные окраски яиц и оперенья, разная структура пера, изабелловая окраска и др.). При этом мутации не оказывают влияния на продуктивные показатели перепелов. Только у перепелов с белым оперением незначительно меньше скорость роста. В России чаще используют яичную японскую и мясную породу фараон и помеси от их скрещивания (московская популяция японских перепелов). У этой помеси более крупная тушка –120–125 г и хорошая яйценоскость — 280–290 яиц в год (Х. Тикк, 2004; Ю. Харчук, 2005; Л. А. Задорожная, 2005; Г. Д. Афанасьев с соавт., 2006, 2013; Б. В. Коваленко, 2008; И. А. Егоров с соавт., 2009; И. И. Голубов с соавт. 2012; И. И. Голубов, 2013, 2014; М. С. Орда, 2017; R. Karapetyan, 2003; E. Gasparino et. al., 2012). Вопросы кормления и составления рационов для перепелов разных возрастных категорий изучены и описаны в работах Н. Буряковой (1998), Е. Варигиной (2008), Л. А. Задорожной (2005), И. А. Егорова (2009), И. Джой (2012), А. И. Петенко с соавт. (2012), А. Н. Ратошного (2012), Б. Я. Кырылиева с соавт. (2017), D. Sharma et al. (2000), E. M. Sorrell (2007).

Повышению показателей роста и развития перепелов, их продуктивности и сохранности, улучшению воспроизводительных показателей снижению себестоимости продукции на фоне применения биологически активных препаратов: пробиотиков, антиоксидантов, сырого жира, сапропеля и др. — посвящены исследования З. И. Кочетова с соавт. (2000, 2006), М. Ю. Сычева (2010), А. И. Петенко с соавт. (2012), Г. В. Кобыляцкой с соавт. (2013), Ю. А. Лысенко с соавт. (2013), О. В. Кощаева с соавт. (2015), С. В. Хусид с соавт. (2015), Е.В Толпышева с соавт. (2016), Р. Б. Тимираева с соавт. (2017), O. H. Garrido (2001), V. Gushchin et al. (2003), N. Danilevskaya (2005), I. Golubov (2011).

В работах В. Удода (2000), А. И. Рахманова (2004), Ю. Харчука (2005), Т. Н. Столляра (2006), А. И. Серебрякова (2010) представлены данные по улучшению содержания и разведения перепелов.

Н. Е. Арестова (2006) исследовала продуктивность перепелов в зависимости от выбраковки. Установлена связь времени выбраковки молодняка перепелов с их последующей яичной продуктивностью. При выращивании ремонтного молодняка перепелов мясояичного направления продуктивности авторы рекомендуют выбраковывать слабых и отстающих в росте перепелов в возрасте 3 недель, что способствует повышению яичной продуктивности перепелов (интенсивность яйценоскости достигает 88%). В этих группах половая зрелость перепелов наступает в 54 и 55 дней. При выбраковке перепелов в более раннем возрасте (1 или 2 недели) яйценоскость, равную 50%, птица достигла на 7–8 дней позже. Морфологические качества яиц, полученных от перепелов разных групп, не зависят от возраста выбраковки. Интенсивное половое развитие самок начинается с 4-недельного возраста и влияет на живую массу птиц и выход потрошеных тушек. Максимальная масса потрошеной тушки у самок регистрируется в 5-недельном возрасте, у самцов — в 6 недель. Внутренние органы у перепелов развиваются неравномерно. Выбраковка слабых перепелов в возрасте 3 недель привела к увеличению интенсивности яйценоскости на 8,5% и сохранности поголовья за 4 месяца на 4%.

Л. И. Лисунова с соавт. (2006, 2007) исследовали химический состав мяса перепелов. Исследования проведены на перепелах японской породы с суточного до 60-дневного возраста. Кормили птицу в соответствии с нормами для разных возрастных групп. Наибольшая скорость роста зарегистрирована у птиц в возрасте 20–30 суток, наименьшая — в первую неделю жизни. За время наблюдения масса тела птицы увеличилась в 26,6 раза. При изучении минерального состава авторы уделили особое внимание обмену кальция и фосфора. Установлено увеличение концентрации кальция в 1,12, фосфора — в 11,75 раза. В соответствии с этим снижается кальциево-фосфорное отношение. Количество воды в мясе животных и птицы разной упитанности зависит от содержания жира: чем больше жира в мясе, тем меньше влаги. Содержание воды в мышцах взрослых перепелов на 6,0% выше, чем у молодняка. Жиры представляют собой высококонцентрированную форму обменной энергии и участвуют в обмене веществ. Установлено, что у перепелят мышечная ткань в 3,7 раза более жирная, чем у взрослой птицы. Важной составной частью организма являются белки, содержание которых составляет 20% от массы сырой ткани. Содержание белков в мышечной ткани перепелов не имело больших различий и составило всего 2,9% в пользу молодняка. С возрастом у исследуемой птицы произошло увеличение метионина, изолейцина и фенилаланина — в 9,3, 2,9 и 1,54 раза, что свидетельствует о повышении диетических свойств мяса перепелов т.к. метионин помогает переработке жиров, предотвращая их отложение в печени и на стенках артерий, и обеспечивает дезинтоксикационные процессы в организме; изолейцин необходим для синтеза гемоглобина, он стабилизирует и регулирует уровень сахара в крови; фенилаланин в организме превращается в тирозин, который используется в синтезе нейромедиаторов. У суточных перепелят содержание лизина, аргинина, валина, лейцина и триптофана выше, чем у взрослых, но это не снижает ценности мяса взрослых перепелов. Изучению вопросов повышения пищевой и биологической ценности перепелиного мяса посвящены работы И. Стефановой с соавт. (2006), А. В. Макарова с соавт. (2007), Л. И. Лисуновой с соавт. (2007), Г. Д. Афанасьева с соавт. (2015), перепелиных яиц — Г. Н. Ольшанской с соавт. (2004); З. И. Кочетовой (2000, 2006).

Е. А. Мансурова с соавт. (2009), Е.М. Ленченко с соавт. (2012)
изучали экспериментальный эшерихиоз у перепелок. Установлено, что динамика патологических процессов при остром течении болезни характеризуется септицемией, при подостром — энтеротоксемией. Миграция и интерстициальная инфильтрация псевдоэозинофилов развиваются через 4–6 ч, моноцитов — через 7–8 ч после заражения E. coli. Количество энтеробактерий в слепых отростках кишечника перепелов — 4,19±0,15–6,88±0,21 (КОЕ lg/г), индекс колонизации (ИК) эшерихий у 10-суточных перепелов — 0,766, 20-суточных — 0,797, 30-суточных — 0,837. Зона задержки роста E. coli к действию желчи составляет 11,9–17,6 мм.

Л. Г. Коршунова с соавт. (2011, 2016) на большом фактическом материале исследований установили возможность объективной характеристики поголовья перепелов эстонской породы по массе яиц и проведения целенаправленного отбора перепелок без длительной ежедневной оценки птицы (7–50-недельного возраста) для комплектования промышленных и племенных стад, обеспечивая повышение массы яиц у перепелок-дочерей на 3,2–3,5%.

Вопросы генетического улучшения продуктивных признаков перепелов представлены в работах В. И. Фисинина с соавт. (2010), Л. Г. Коршуновой с соавт. (2009, 2011, 2016).

И. А. Алексеев с соавт. (2011), Р. Н. Иванова с соавт. (2012 а, 2012 б) изучали влияние пробиотиков «Бацелл» и «Биоспорин» на продуктивные показатели молодняка перепелов. Авторы рекомендуют вводить в основной рацион молодняка перепелов в 1–30-суточном возрасте пробиотики «Бацелл» в количестве 0,2% от массы сухого комбикорма (2 кг на 1 т) и «Биоспорин» — 0,05 мл в расчете на одну голову. Это способствует активному росту птиц: длина туловища, ширина и обхват груди, ширина таза были выше по сравнению с контрольной группой на 0,16–2,54% (Р<0,05), среднесуточный прирост живой массы перепелов на 14-е сутки наблюдения увеличивается на 5,17 и 4,76% (Р<0,01), на 56-е сутки — на 6,31 и 5,89% (Р<0,01). Предубойная масса повышается по сравнению с контрольными цифрами на 6,45 и 6,08% (Р<0,01), масса потрошеной тушки — на 8,78 и 6,68% (Р<0,01), убойный выход — на 2,18 и 0,56% (Р<0,05), увеличивается масса внутренних органов птиц: сердца — на 6,46 и 6,03% (Р<0,05), печени — на 6,73 и 7,21% (Р<0,05), легких — на 5,77 и 4,81% (Р<0,05), почек — на 6,66 и 4,76% (Р<0,05), селезенки — на 6,67 и 5,71% (Р<0,055). Пробиотики «Бацелл» и «Биоспорин» способствовали повышению показателей естественной резистентности перепелок: бактерицидной активности сыворотки крови на 1,16–8,12% и 0,97–7,33% (Р<0,01), лизоцимной — на 1,10–6,45 и 0,86–5,21% (Р<0,01), фагоцитарной активности крови — на 1,66–8,38 и 1,59–7,14% (Р<0,001).

Г. С. Шмидт с соавт. (2012) установили, что основными представителями условно-патогенной микрофлоры толстого кишечника у перепелят являются энтерококки, эшерихии, стафилококки, дрожжеподобные грибы. При дисбактериозе появляются еще бактерии родов Proteus и Salmonella. Авторы исследовали биохимическую активность различных представителей микрофлоры толстого отдела кишечника. У здоровых перепелят и птенцов с признаками дисбактериоза значительного изменения ферментативной активности у схожих видов микроорганизмов не замечено. Отмечается повышение вирулентности культур, выделенных от перепелов с явлениями дисбактериозов, при постановке биопробы на лабораторных мышах.

Г. Д. Афанасьев с соавт. (2014 а, 2014 б), Л. А. Попова с соавт. (2014) применяли каротиносодержащие препараты «Биофон желтый» и «Биофон красный», которые способствовали повышению уровня каротиноидов в перепелиных яйцах. Установили, что изменение концентрации и соотношения препаратов, определение оптимальных их доз позволяют управлять интенсивностью цвета желтка, уровня каратиноидов в яйцах, а также способствуют улучшению воспроизводительных качеств, результатов инкубации и сохранности молодняка. Препарат «Биофон желтый» способствует улучшению сохранности инкубационных яиц и их выводимости. Положительных тенденций в отношении мясных показателей перепелов под влиянием изученных препаратов не установлено.

На повышение продуктивности перепелов яичной породы при использовании разных источников каротиноидов указывает в своей работе Л. Беляева (2011).

М. В. Заболотных с соавт. (2015) изучали продуктивные показатели мясной и яичной продуктивности перепелов породы фараон под влиянием сапропеля. Птенцам в корм добавляли сапропелевую минеральную добавку в расчете 3 г/гол в сутки. Сорбционную активность сапропеля оценивали по критерию практического коэффициента полезного действия (КПД). Установлено, что включение сапропелевой минеральной добавки как сорбента микотоксинов эффективно вследствие высокого сорбционного свойства добавки, КПД составила 86,2%. Также отмечено повышение сохранности поголовья на 2,5%, увеличение интенсивности среднесуточного прироста живой массы перепелов на 7,4%, увеличение средней массы перепелиного яйца на 6,89%.

Б. А. Бидеев с соавт (2014, 2015), О. К. Гогаев с соавт (2016 а, 2016 б)
исследовали продуктивные качества и биологические особенности перепелов английской белой породы, пород эстонская, фараон, маньчжурская, смокинговая. Они установили лучшие породы для производства мяса птицы и яиц и разработали рецептуру приготовления из них сырокопченой колбасы. При этом при одинаковых условиях содержания и кормления сохранность перепелов английской белой породы за период исследований составила 94%, породы фараон — 93%, маньчжурской — 92%, смокинговой — 94%, эстонской — 93%. К 60-суточному возрасту в сыворотке крови перепелов всех изучаемых пород достоверно повышается содержание общего белка на 25,92–37,78% (P>0,999), билирубина — 20,00–46,15% (P>0,999), мочевины — 3,80–15,35% (P>0,95), фосфора — 32,59–45,67% (P>0,999), калия — 4,66–7,37% (P>0,95), натрия — 63,07–66,85% (P>0,999) и уменьшается содержание холестерина на 7,46–4,35% (P>0,95). В процессе эксперимента по показателям роста и развития доминировали перепелята английской белой породы. На 50-е сутки живая масса перепелят этой породы была равна 242,8 г и оказалась выше, чем у эстонской породы, на 11,99% (P>0,99), маньчжурской — 18,90% (P>0,999), смокинговой — 16,67% (P>0,999), породы фараон — 4,07% (P>0,99). Самое высокое значение массы потрошеной тушки регистрировалось у английской белой породы — 183,4 г, с убойным выходом 79,97%. У других пород значения были ниже и составили: у фараона — 178,5 г и 77,87%; у смокинговой породы — 171,9 г и 77,92%; эстонской — 172,7 г и 76,61%; маньчжурской — 167,3 г и 76,2%. Яйценоскость на среднюю несушку маньчжурской породы составила 108,3 шт., что было выше, чем у английской белой породы, на 12,3% (P>0,99), породы фараон — 7,9% (P>0,95), смокинговой — 4,5%, (P>0,99), эстонской — 2,7% (P>0,95). Самая низкая яйценоскость на среднюю несушку была у английской белой породы и составила 96,4 яйца. Но масса яиц английской белой породы была выше. Меньше масса яйца была у перепелов эстонской породы — 13,34 г, что было ниже, чем у породы фараон, на 3,5%, маньчжурской — на 1,4%. При этом яйца перепелов английской белой породы по массе белка и желтка также превосходили показатели других пород: породу фараон на 2,0 и 3,6%, эстонскую — 0,5 и 5,9%, смокинговую — 1,8 и 2,9%, маньчжурскую — 0,08 и 0,27 г или 0,9 и 6,2%, соответственно. Исходя из полученных данных, авторы рекомендуют использовать для производства мяса английскую белую породу, а для производства яиц — маньчжурскую породу.

Е. В. Толпышев с соавт. (2016) исследовали влияние сапропеля на микробиологические показатели мяса перепелов. Опытная группа была разбита на 4 подгруппы, две из них получали 1 и 2% ЭС, две остальные — 1% ЭС+5 мл/л «Байтрила» и 2% ЭС+10 мл/л «Байтрила» в сутки. Микробная обсемененность по КМАФАнМ, при отсутствии достоверных изменений в контрольной, в 1-й, 2-й и 4-й опытных группах была ниже на 39,9; 54,5; 37,9% (Р<0,001). При этом в образцах мяса птиц опытных групп отсутствовали условно-патогенные и патогенные микроорганизмы. На 10-е сутки содержание КМАФАнМ было ниже на 61,69%. На 42-е сутки общая бактериальная обсемененность мяса была выше в 1,46–2,97 раза, однако показатели оставались в пределах нормы (1.10⁵ КОЕ/г), установленной СанПиН. Представленные данные свидетельствуют о нормальном течении автолитических и окислительных процессов в мышечной ткани перепелов опытных групп и об отсутствии отрицательного влияния сапропеля на качество мяса перепелок.

Б. Я. Кырылив с соавт (2017) исследовали влияние кормовой добавки «Било-Актив» в кормлении перепелов в комплексе с микроэлементами (медь, цинк и марганец). Установлено, что у птиц, которым в корм добавляли «Било-Актив» вместе с надбавкой Zn, Cu, Mn, значительно увеличивалась масса тела (251,95 г, что выше на 12,67% по сравнению с контролем) и яйценоскость (выше на 7,37% по сравнению с контролем). Также установлено повышение биологической и пищевой ценности полученных яиц и мяса.

Р. Б. Темираев с соавт. (2017) изучали влияние добавок разных доз антиоксиданта «Хадокс» на морфологические и биохимические показатели крови перепелов, выращиваемых на мясо. Скармливание разных доз антиоксиданта не оказало существенного влияния на показатели морфологического состава крови перепелов, что свидетельствует о том, что морфологический состав крови перепелов менее подвержен изменениям под воздействием кормового фактора. Включение в рационы разных доз препарата «Хадокс» не оказало существенного влияния на кислотно-щелочное равновесие в крови подопытной птицы. Лучшее действие на усвояемость макроэлементов оказало скармливание препарата «Хадокс» в дозе 150 г/т корма, благодаря этому в сыворотке крови перепелов 2-й опытной группы против контрольных аналогов содержалось достоверно (P>0,95) больше кальция на 0,47 ммоль/л и фосфора — на 0,44 ммоль/л. Антиоксидант в этой дозе оказывал положительное воздействие на уровень липидного метаболизма в организме птицы, что подтверждалось снижением концентрации холестерола на 15,27%, при одновременном увеличении фосфолипидов на 24,16% (P>0,95). Также установлено стимулирующее действии антиоксиданта на интенсивность белкового метаболизма. Авторы рекомендуют для оптимизации показателей морфологического и биохимического состава крови и ингибирования процессов перекисного окисления липидов в рационы откармливаемых перепелов включать антиоксидант «Хадокс» в дозе 150 г/т комбикорма.

В статье А. В. Филатова и А. Ф. Сапожникова (2015) рассматривается влияние биологически активной добавки «ВЭРВА» на рост, развитие, сохранность и продуктивность перепелов японской породы. «ВЭРВА» содержит действующее вещество в виде водорастворимых солей тритерпеновых кислот, а также флавоноиды, каротиноиды, полипренолы, ситостерин, микро- и макроэлементы — кальций, калий, магний, железо, серу, марганец, фосфор, кремний. Установлено, что применение добавки «ВЭРВА» с питьевой водой в концентрации 1:400 и 1:300 в течение первых 30 суток выращивания повышает биоресурсный потенциал перепелов. При этом отмечается прирост живой массы перепелов, более раннее формирование репродуктивных органов. У самок живая масса превышает на 5,8% (P<0,05) контроль, она выше, в сравнении с показателями птиц контрольной группы, на 1,48 г (P<0,05), у самцов — на 2,05 г (P<0,05). Под влиянием «ВЭРВА» регистрируется активизация белкового обмена — повышение в сыворотке крови общего белка на 13,11% (P<0,05), количества альбуминов на 2,9%, альфаглобулинов на 19,3%, соотношения альбуминов к глобулинам на 11,2%. Это в конечном итоге проявлялось увеличением на 50% яйценоскости.

М. С. Орда (2017) описывает наиболее распространенные болезни у перепелов — псевдочуму, орнитоз, пуллороз, аспергиллез, колибактериоз, протозоозы, гельминтозы. Среди протозойных болезней чаще встречается эймериоз, вызываемая простейшими паразитами рода Eimeria, которые размножаются в кишечном тракте, поражая ткани. Это приводит к нарушению процессов пищеварения и всасывания, обезвоживанию организма, потере крови. Содержание перепелов в закрытых загонах благоприятствует распространению заражения. Возбудителями эймериоза являются несколько видов эймерий. Повреждение тканей и функциональные изменения кишечного тракта могут привести к заселению организма различными видами патогенных бактерий (Clostridium perfringens, вызывающими некротический энтерит, или Salmonella typhimurium). Совместно с эймериозом могут протекать инфекции, подавляющие формирование иммунитета, что приводит к усилению тяжести заболевания. Так, болезнь Марека может снизить развитие иммунитета против эймериоза, а инфекционный бурсит — сделать более тяжелым течение болезни, снижая эффективность антикокцидийных лекарственных средств. Авторы представили данные по эффективности препарата «Мадукокс-ВБФ» (Madukoks-VBF) при эймериозе перепелов. В качестве активнодействующего вещества препарат содержит 10 г мадурамицина аммония в 1 кг препарата и наполнитель. Мадурамицина аммоний обладает широким спектром кокцидиоцидного действия. Действует на кокцидий в стадии спорозоита, трофозоита и шизонта. Относится к группе полиэфирных монокарбоксильных ионофорных антибиотиков. Механизм действия ионофоров заключается в способности образовывать липофильные комплексы с ионами щелочных и щелочноземельных металлов и переносить их через клеточную стенку паразита, что приводит к нарушению осмотического баланса и гибели простейших. Препарат практически не всасывается в желудочно-кишечном тракте птиц и выводится из организма преимущественно с фекалиями в течение 2–3 дней. «Мадукокс-ВБФ» использован в смеси с кормом, утром, в течение 5 дней (в дозе 0,5 г на 1 кг корма или 500 г на 1 т корма, что соответствует 5 мг/кг птицы по действующему веществу). Исследован на птицах с клиническими признаками эймериоза. Установлено, что экстенсэффективность препарата «Мадукокс» при эймериозной инвазии составляет 90%, у перепелов восстанавливалась функция пищеварительного тракта. Препарат улучшал функцию желудочно-кишечного тракта и значительно способствовал снижению интенсивности инвазии.

1.2 Биологическая активность пчелиного подмора

Самый ценный подмор — летний или осенний, так как в это время в тельцах пчел накапливается огромное количество полезных веществ. В летние месяцы у пчел есть возможность питаться свежей пыльцой и нектаром, они энергичнее и здоровее. Правильно высушенные тела пчел, измельченные и растертые в порошкообразную массу, превращаются в кладезь целебных веществ. В подморе выявлено присутствие компонентов меда, маточного молочка, пыльцы, яда, прополиса, воска — всё это в комплексе оказывает положительное воздействие на органы и системы, попадая внутрь организма. Химический состав сухого подмора пчел следующий: влага — 10%, минеральные вещества — 3,0%, хитин — 12%, белок — 75%. В хитиновом покрове выделен хитозановый комплекс — пчелозан. В хитозановом комплексе присутствуют: гепарин, глюкозамины, меланин, пчелиный яд, кислота уксусная. Водорастворимый полимер меланин может поглощать различные радикалы и служить сильнейшим антиоксидантом, генным и фотопротектором, антимутагеном. Пчелиный яд устойчив к высоким температурам при сушке и продолжает сохранять свои уникальные свойства. В пчелином подморе обнаружены: 27 микроэлементов, среди них — кальций, хром, алюминий, серебро, железо, медь, молибден, магний, кремний, фосфор, цинк; витамины Е, К, D, P, С; белки, аминокислоты, пищевые волокна, жир.

Особый интерес в последние годы уделяется в медицинской, ветеринарной и биологической науке изучению хитозана (ХТЗ, 2-амино-2-дезокси-β-D-глюкана). Доказана его высокая антибактериальная активность в отношении грамположительных и грамотрицательных микробов (А. В. Ильина, 2008; Ю. А. Петрович с соавт., 2008; Р. С. Фассахов с соавт. 2009; H. Barzegar, 2008; P. Eaton et al., 2008; M. C. Bonferoni, 2014; L. Gasettari, 2014). Это, видимо, обусловлено наличием у ХТЗ протонированных аминогрупп, положительный заряд которых способствует связыванию его с анионами на поверхности структур микробов за счет электростатического взаимодействия (J. Simunek et al., 2006; S. Stopinsek et al., 2011; Y. Huang et al., 2013; I.C.F.R. Ferreiraet et al., 2014; D. Fong, et al. 2015; G. Karam et al., 2016). Грамотрицательных микробов более чувствительными к действию ХТЗ делает наличие на их поверхности отрицательно заряженного липополисахарида (ЛПС). Изменения в клеточной стенке бактерий делают их более подверженными к действию антибактериальных препаратов из хитозана (Е. В. Крыжановская, 2008; H. Liu et al., 2004; M. Kong et al., 2010; Y. Tao et al., 2011; M. Zhang et al., 2012; F. Wu et al., 2014; K. Li et al, 2015; Z. Sun et al., 2017; Y. Wang et al., 2017).

Исследования многих авторов посвящены применению ХТЗ в составе противомикробных препаратов (А. Б. Шиповская с соавт., 2008; G.-Q. Lin et al., 2011; M. C. Bonferoni et al., 2014; S. Li et al., 2014; W. A. Koekkoen et al., 2016).

При применении препаратов из пчелиного подмора, содержащего большое количество специфического, более активного хитозана, проявляются следующие эффекты: противовирусный и антибактериальный, иммуностимулирующий, антитоксический, антиоксидантный, радиопротекторный, регенерирующий, гепатопротекторный. Благодаря содержанию в подморе пчел меланина кожа защищается от неблагоприятного влияния УФ-лучей и бактерий. Он обладает гиполипидемическим (освобождение организма от избытка жиров) и гипохолестеринемическим эффектом. Подмор обладает обезболивающим и кровоостанавливающим действием. Также полезен подмор для кроветворения. Благодаря растворимым компонентам хитозана снижается уровень глюкозы в крови, отмечается нормализация кислотности и количества желудочного сока, нейтрализация его избытка, заживление поврежденной слизистой желудка, поэтому пчелиный подмор оказывает благоприятное действие при диабете, заболеваниях желудочно-кишечного тракта, способствует восстановлению естественного микробиоценоза кишечника. Пчелиный подмор замедляет и предотвращает развитие мутаций клеток, в том числе раковых. Наружное применение настоек и мазей из подмора способствует рассасыванию плотных образований при мастопатии, лечит суставные боли, аденому простаты (Н. И. Шрамм с соавт, 2014; Ф. Ф. Шарнина с соавт., 2012; Л. А. Скребнева с соавт., 2014; Г. В. Кашина с савт., 2015; Е. С. Салтыкова с соавт., 2018; Д. В. Митрофанова с соавт., 2018; J. S. Moon et al., 2007; M. Canali et al., 2010; J. Guzman-Morales et al., 2011; Y. Miyoshi et al., 2012; H. Tan et.al., 2013; F. Tang et al., 2016).

Z. N. Berikashvili (2004), З. Н. Берикашвили с соавт. (2009, 2010) исследовали бактерицидную активность экстракта на основе пчелиного подмора в стоматологии и установили высокую антимикробную активность экстрактов пчелиного подмора к Streptococcus species, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus. Авторами обоснована возможность использования водно-спиртовых экстрактов пчелиного подмора в качестве ингредиента к ополаскивателям, добавки к гелям, эликсирам, зубным пастам.

А. И. Албулов с соавт. (2004), Д. В. Герасименко с соавт. (2005), D. V. Gerasimenco et. al. (2004) установили, что полученные ферментативным гидролизом препараты низкомолекулярного водорастворимого хитозана характеризуются выраженными антибактериальными свойствами, вызывая практически полную гибель всех микроорганизмов. Установлено действие хитозана на клинические штаммы Candida albicans, Klebsiella pneumoniae и Staphylococcus aureus. Так, культура С. albicans оказалась чувствительной ко всем изученным препаратам крабового и пчелиного хитозана. Экспериментально доказано, что большинство микроорганизмов чувствительны к 1%-ному раствору хитозана на 0,2%-ном растворе соляной кислоты. Грамположительные микроорганизмы проявляли 100%-ную чувствительность к хитозану. Наиболее восприимчивы были стафилококки и коринебактерии, менее чувствительны — стрептококки и грибы рода Candida. Низкомолекулярный хитозан в настоящее время рекомендуют для борьбы с кандидозной инфекцией — распространенным заболеванием человека и животных. Кроме того, препараты низкомолекулярного хитозана вызывали гибель Kl. pneumoniae и S. aureus (M. Masson et al., 2008; T. Ghosh et al., 2009; X. Wang et al., 2010; Y. Qiao et al., 2011; R.A.A. Muzzarelli, 2011; I. U. Schraufstater et al, 2012; G. Karam et al., 2016; D. Raafat, 2017).

Н. В. Погарская с соавт. (2008), М. И. Селионова с соавт (2010) получили хитозан-меланиновый комплекса из подмора пчел. Авторы провели исследование его влияния на организм для профилактики дисбактериоза молодняка козлят зааненской породы. Установлено, что хитозан-меланиновый комплекса в дозе 10–15 мг на кг живой массы способствует нормализации желудочно-кишечной микрофлоры, активизации иммунных реакций, повышению защитных свойств организма, что, в свою очередь, оказывает благоприятное влияние на рост и развитие молодняка.

Е. А. Дунаева, Д. А. Арешидзе (2009) изучали влияние спиртового экстракта подмора пчел на адаптацию организма крыс линии вистар на предельную физическую нагрузку. Результаты исследования показали, что продолжительность плавания крыс экспериментальной группы ко второй неделе эксперимента оказалась достоверно выше, превышая показатель контрольной группы в 1,5 раза. Этот процесс проявлялся до конца эксперимента. В мышцах крыс контрольной группы количество ядер на поле зрения составило 48,47±3,42, в экспериментальной группе — 34,5±5,2. В крови животных экспериментальной группы достоверно выше, чем в крови контрольных крыс, среднее содержание гемоглобина в эритроците — 21,0±2,8 и 15,6±1,6, средняя концентрация гемоглобина — 372,2±8,4 г/л и 272,6±7,2 г/л, а также само содержание гемоглобина в крови — 130,2±4,8 г/л и 112,4±3,2 г/л. При этом показатель гематокрита был выше (56,4±2,7%), чем в контроле — 34,8±3,1%. Следовательно, система крови справляется с нагрузкой путем интенсификации функций находящихся в крови эритроцитов, а система крови крыс контрольной группы — за счёт увеличения количества эритроцитов в кровеносном русле. Об этом свидетельствует то, что количество эритроцитов в крови крыс контрольной группы к концу эксперимента существенно выше, чем в крови экспериментальных животных — 10,10±0,6 г/л и 6,28±0,4 г/л, соответственно. При этом содержание гликогена в мышцах и печени крыс контрольной группы оказалось достоверно ниже его уровня в опытной группе. В печени крыс экспериментальной группы среднее содержание гликогена составляет 2,2±0,1 балла против 1,7±0,11 в контроле. В кардиомиоцитах эти показатели составили 1,8±0,2 балла в эксперименте и 1,3±0,11 балла в контроле, в скелетной мускулатуре эти же показатели составили 1,9±0,1 балла и 1,6±0,15 балла. Полученные данные показывают, что пчелиный подмор оказывает стимулирующее действие на скелетную и сердечную мускулатуру.

А. В. Бакулин с соавт. (2011) получили комплекс хитозана и его производных с меланиновыми пигментами различного происхождения. Установили влияние различных факторов на процесс комплексообразования. Исследования физико-химических характеристик полученных комплексов проведены с применением термогравиметрического, элементного анализов и с помощью метода электронного парамагнитного резонанса. Авторами доказано явление самопроизвольного увеличения концентрации парамагнитных центров в структуре хитозан-меланинового комплекса. Установлена способность нерастворимых хитозан-меланиновых комплексов связывать из раствора радионуклиды (уран и стронций). Определены значения коэффициентов распределения, степени извлечения, а также емкость хитин/хитозан-меланиновых комплексов в виде порошка и фанулированного сорбента. Авторы установили антиокисидантные свойства водорастворимых комплексов производных хитозана и меланина. В работах доказана возможность комплексов ингибировать процесс разрушения ДНК фага продуцентами пероксидазного окисления бензидина. Установлено влияние хитозан-меланиновых комплексов на физическую работоспособность. Методом изотермической калориметрии определены термодинамические параметры процесса комплексообразования. В условиях in vivo выявлена способность комплекса сульфосукциноил хитозан-меланин продлевать выживаемость мышей в условиях недостатка кислорода, избытка углекислого газа, а также при нарушении потребления кислорода тканями. Поэтому данный комплекс может послужить основой для создания препаратов антигипоксического действия. Создана технологическая схема переработки молочной сыворотки с использованием хитозана и технологическая инструкция на производство белкового продукта со сниженными аллергенными свойствами. Эти данные, представленные А. В. Бакулиным с соавт. (2011) являются также комплексными исследованиями с другими авторами (Л. Р. Алиева с соавт., 2010; I. I. Azarko et.al., 2009, 2010; A. V. Bakulin et. al., 2011).

Л. А. Скребнева с соавт (2012) изучали особенности аккумуляции тяжелых металлов в медоносных пчелах различных временных генераций: зимней (подмор), летней и осенней, отобранных в районах с различной степенью техногенного загрязнения, а также исследована потенциальная возможность использования меда в качестве биоиндикатора. Проведен анализ содержания микроэлементов Fe, Mn, Zn, Cu, Ni, Cr, Co, Pb, Cd в 53 образцах медоносных пчел и 5 образцах меда методом атомно-абсорбционной спектрометрии. Обнаружены статистически значимые отличия в содержании тяжелых металлов в образцах пчел в зависимости от периода их жизнедеятельности и места отбора проб. Установлена возможность использования летней и осенней генерации медоносных пчел для контроля загрязнения наземных экосистем. Исследованные образцы меда содержали тяжелые металлы в низких концентрациях, не превышающих ПДК для пищевых продуктов.

Ф. Ф. Шарнина (2012) исследовала особенности кислотного гидролиза хитин-глюкановых комплексов высших грибов и подмора пчел. Автором разработана технология выделения и очистки из гидролизата D (+)- глюкозамина гидрохлорида высокого качества. Состав, свойства и чистота продукта проанализированы с использованием комплекса физико-химических методов. Выход конечного продукта составил 20–60% в зависимости от содержания хитина в образцах ХГК. Полученный аминосахар представлял собой белый кристаллический порошок без запаха, легко растворимый в воде, малорастворимый в спирте и нерастворимый в хлороформе и в других органических растворителях, и по основным показателям соответствовал качеству стандартного D (+)- глюкозамина гидрохлорида.

Н. И. Шрамм с соавт (2014) проводили исследования природы экстрагента, измельченности сырья, способа экстрагирования на эффективность экстракции аминокислот в извлечениях из пчелиного подмора. Авторами выбраны оптимальные условия изготовления, извлечения из пчелиного подмора: экстрагент — 40%-ный этанол, сырье неизмельченное; разработан метод получения — ремацерация или вихревая экстракция. Исследовано влияние вида экстрагента и времени настаивания на выход аминокислот в процессе экстрагирования личинок восковой моли. Установлено, что оптимальным экстрагентом является 25%-ный этанол, метод получения — мацерация с периодическим перемешиванием в течение 11 суток. При этом в извлечение переходит 13 аминокислот, и их суммарное содержание составляет 12,5 мг%.

А. К. Скрябин с соавт. (2014) описали удивительные свойства хитозана. Хитозан — нерегулярный сополимер глюкозамина с N-ацетил-D-глюкозамином. Встречается в кутикулах насекомых, в том числе и пчел, в панцирях ракообразных, клеточных стенках грибов. Образуется деацетилированием хитина. Плохо растворим в воде, хорошо — в кислотах. Растворимость в воде можно повысить за счет снижения молекулярной массы. Характеризуется высоким содержанием аминогрупп, которые легко связывают катионы металлов. Хитозан образует ионные, гидрофобные и водородные связи, напр., с белками и нуклеиновыми кислотами. Нетоксичен, биоразлагаем. Применяется в медицине в качестве средства для доставки лекарств, пролиферации фибропластов, как перевязочный и шовный материал, для изготовления искусственной кожи, органов и тканей, контактных линз, при заживлении ран, является иммуномодулятором; в пищевой промышленности используется как антибактериальный агент, в качестве загустителя и структурообразователя для продуктов диетического питания, для осветления пива, соков, вин; в сельском хозяйстве применяется для повышения устойчивости растений к болезням, как регулятор роста, для обработки семян и черенков; в косметологии — в качестве увлажнителя, эмульгатора, антистатика, смягчающего средства для ухода за волосами и кожей лица; в биотехнологии — для очистки сточных вод, получения биосенсоров, переноса генов (О. В. Алексеева, 2015; R. Patil et al., 2015; S. Pina et. al., 2015; N. S. Sambudi, 2015).

Г. В. Кашина с соавт. (2014, 2015) изучали физико-химические показатели, определяли наличие отдельных микроэлементов в свежем пчелином подморе, полученном в Новосибирской области, и представили следующую концентрацию микроэлементов в теле пчелы (свежий подмор), мг/кг (M±m, n=5): цинк — 91,3±0,35; железо — 178,3±0,42; кадмий — 1,5±0,09; медь — 1,3±0,10; никель — 5,6±0,38; свинец — 9,3±0,11; кобальт — 0,8±0,10.

T. С. Салтыкова с соавт. (2018), проводя осеннюю обработку пчелиных семей с добавлением хитозана (0,01%), установили снижение обсеменения кишечника пчел спорами ноземы. Это свидетельствует об усилении гуморальных защитных механизмов кишечника пчел под действием хитозана, который активирует профенолоксидазу и запускает сигнальную трансдукцию, контролирующую экспрессию антимикробных пептидов. Процесс сопровождается генерацией активных форм кислорода, антиоксидантных ферментов, защищающих клетки и ткани насекомого от окислительного повреждения.

Д. В. Митрофанова с соавт. (2018) исследовали физико-химические свойства свежего и после хранения, через 6 мес., 1 и 2 года, хитин-хитозан-меланинового комплекса. Определяли влажность, окисляемость, рН, свободную кислотность, кислотное число, йодное число. В течение года все изученные показатели изменяются незначительно. При дальнейшем хранении, особенно через 2 года, значительно снижается показатель рН и свободная кислотность. Следовательно, срок годности хитин-хитозан-меланинового комплекса должен не превышать 1 года.

Анализ представленных литературных данных свидетельствует об уникальном, комплексном, благоприятном сочетанном химическом составе подмора пчел. Это обуславливает его высокую, разностороннюю биологическую активность. Однако в литературе отсутствуют комплексные исследования по изучению влияния пчелиного подмора на организм животных и практически отсутствуют данные по исследованию влияния его на организм птиц. В этой связи нами были проведены исследования по изучению влияния разных доз экстракта пчелиного подмора на биологические и продуктивные показатели перепелов.

Глава 2.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились в лабораториях кафедр микробиологии и иммунологии, аквакультуры и пчеловодства ФГБОУ ВО «РГАУ — МСХА имени К. А. Тимирязева» аспирантом кафедры микробиологии и иммунологии Иссе Мохамед Яссин под руководством д.б.н. профессора Р. Т. Маннаповой. Экспериментальная часть работ проводилась в условиях птичника кафедры частной зоотехнии. Условия содержания и кормления перепелок соответствовали зоотехническим нормам, предъявляемым к данному виду птицы в условиях промышленного разведения. Вскрытие тела перепелок проводили на основании методики С. Б. Селезнева (2013). Приготовление препаратов для морфологических исследований проводили в лаборатории морфологии отделения патологической анатомии Российского онкологического центра имени Н. Н. Блохина и на кафедре ветеринарии РУДН.

В работе были использованы перепела мясной французской породы в количестве 140 штук, которые были выведены путем инкубирования в условиях инкубатора птичника кафедры частной зоотехнии. Птиц, по принципу аналогов, разделили на 4 группы. 1-я группа — контрольная, 2-я, 3-я, 4-я — опытные, которым с 15-суточного возраста с питьевой водой выпаивали в течение 30 суток низкие, средние и высокие дозы экстракта пчелиного подмора, предварительно растворив в питьевой воде из расчета 0,1 мл экстракта пчелиного подмора (ЭПП) на 100 г массы птиц. При средней живой массе перепелов к началу опытов (15-дневные перепелята) 55–57 г дозы составили: 2-я группа — 0,05 мл/гол. (1 капля на птицу, 10 капель на 10 птиц на 100 мл воды), 3-я — 0,1 мл/гол. (2 капли на птицу, 20 капель на 10 птиц на 100 мл воды), 4-я — 0,3 мл/гол (6 капель на птицу, 60 капель на 10 птиц на 100 мл воды.) С 1 по 14-е сутки (15–29-дневные перепела) эксперимента выпаивание раствора проводили индивидуально, из пипеток, а в последующие сроки — групповым методом, из поилок. Перерасчет доз ЭПП с учетом увеличения массы птиц проводили на 14-е сутки опыта (29-суточные перепела) и ее не изменяли до конца эксперимента (30-е сутки опыта, 45-дневные перепела).

Убой птиц для взятия материала с целью проведения гематологических, иммунологических, иммуноцитологических, иммуноморфометрических, микробиологических исследований разных отделов желудка и кишечника проводили на 7, 14, 30, 45, 60, 90 и 210-е сутки от начала опыта.

Гематологические исследования проводили на гематологическом ветеринарном анализаторе автомате «PCE-90 Vet». Бактерицидную активность сыворотки крови определяли по методу Мишеля Теффера в модификации О. В. Смирновой и Т. А. Кузьминой (1966), который основан на измерении оптической плотности мясопептонного бульона при росте в нем E.coli с добавлением и без добавления испытуемой сыворотки; лизоцимную — по В. Г. Дорофейчуку (1983) с тест культурой М. lisodecticus. Определение фагоцитарной активности нейтрофилов крови проводили методом В. М. Бермана и Е. М. Славской (1982), с использованием тест-культуры Staphylococcus aureus. Фагоцитарная активность лейкоцитов выражается в процентном отношении участвующих в фагоцитозе лейкоцитов к общему числу подсчитанных нейтрофильных лейкоцитов.

Взвешивания птиц и лимфоидных органов проводили на весах ВЛКТ-500М (ГОСТ 241–04–80) с точностью до 0,001 г. Анатомическое вскрытие птиц осуществляли согласно методике, предложенной А. В. Жаровым (2003). Абсолютную массу тимуса, селезенки, сумки Фабрициуса определяли сразу же после вскрытия. Для морфологических исследований кусочки органов фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилин-эозином, азур II эозином. Площадь зон лимфоидных органов определяли методом точечного счета А. А. Глаголева, с использованием окулярной сетки, под стереоскопической лупой МБС-9 (Г. Г. Автандилов, 1990). Метод состоит в случайном наложении сетки на гистологический срез и в подсчете количества ее узловых точек, падающих на структурные элементы органа. Количество точек, приходящихся на каждый структурный элемент, по отношению к их общему числу точек, падающих на срез в целом, и представляет собой относительную площадь в процентах, так как за 100% берется общее количество точек (Г. Г. Автандилов, 2002), то есть подсчитывали количество точек (пересечений линий сетки) на всю измеряемую зону и полученные числовые показатели переводили в проценты. Мазки из пунктата костного мозга окрашивали по Паппенгейму. Подсчет клеток в мазках костного мозга осуществляли под микроскопом Axiostar Plus (Carl Zeiss) с использованием 100-узловой морфометрической сетки, разделенной на квадраты (Г. Г. Автандилов, 1990). Фотографирование гистологических препаратов производили с помощью установки для микрофотографирования, состоящей из микроскопа Carl Zeiss Axiostar Plus и фотографической насадки с фотоаппаратом CANON PowerShot A640.

Для качественного исследования микрофлоры кишечника взятие фекалий производили в стерильную посуду с 9–10 мл изотонического раствора натрия хлорида с глицерином. В лабораторных условиях тщательно перемешивали и оставляли на 10–15 минут при комнатной температуре, посев суспензии фекалий проводили на ряд элективных и дифференциальных сред.

Для выделения из мышечного и железистого отдела желудка и из тонкого и толстого отделов кишечника перепелов Staphylococcus aureus использовали кровяной солевой МПА. Из чистой культуры, выращенной на МПА, ставили реакции на плазмокоагуляцию, фибринолизин, лецитиназу, ДНК-азу и скрытую гемолитическую активность. Стрептококки культивировали на МПА с 1% глюкозы и 5% крови барана и МПБ с 1% глюкозы и 10% инактивированной сыворотки крови лошади, средах Гарро и КАМП-методом. Эшерихии выделяли на МПА, МПБ, средах Эндо и Левина. Чистую культуру эшерихий типировали в реакции агглютинации. Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium культивировали на средах азидно-глюкозном бульоне, селективном агаре по Сланецу и Бертли и на канамицин эскулин азид агаре (с целью подавления роста сопутствующей микрофлоры). Выделение Bifidobacterium spp. проводили посевом больших разведений фекалий в среду Блаурокка. В пробирки с 13–15 мл регенерированной в течение 45 минут среды Блаурокка засевали 1 мл фекалий в разведении от 10–7 до 10–10. Посевы инкубировали при температуре 37 оС в течение 24 часов. Lactobacillus spp. выращивали на среде МРС. Кислотообразующую активность популяции лактобацилл определяли на стандартных пластиковых чашках Петри глубинным посевом разведений на агар МРС с 1% мела после 16-часового культивирования при температуре 39о С по зонам просветления агара. Зоны просветления измеряли в миллиметрах от края колоний. Candida albicans выделяли на средах Сабуро, сусло-агаре и ставили реакцию на ферментацию глюкозы и мальтозы. Результаты переводили в десятичные логарифмы и устанавливали относительное соотношение различных групп микроорганизмов в желудочно-кишечной популяции.

Статистический анализ полученных количественных данных проводили с использованием программ Statistica 6.1 и приложения Excel из пакета MS Office XP.

Глава 3.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Влияние экстракта пчелиного подмора на гематологические показатели перепелов

Результаты исследований по изучению влияния разных доз ЭПП на динамику изменения содержания в крови перепелов эритроцитов, гемоглобина и значение гематокрита представлены в таблице 1.

Содержание эритроцитов в крови перепелов 2-й группы, на фоне внесения в рацион с питьевой водой низкой дозы ЭПП, к 7-м суткам от начала опыта не отличалось от его уровня в крови птиц 1-й группы. Средняя доза (3-я группа) способствовала некоторому повышению уровня эритроцитов, по сравнению с контрольным уровнем — в 1,07 раза (на 0,2·10¹²/л). Уровень эритроцитов в крови птиц 4-й группы (высокая доза), напротив, в 1,08 раза был ниже, чем в контроле.

На 14-е сутки эксперимента от начала опытов максимальное содержание эритроцитов регистрировалось в крови перепелов 3-й группы, оно превысило данные по 1-й, 2-й и 4-й группам, соответственно, в 1,23; 1,07 и 1,61 раза (на 0,8; 0,3 и 1,6·10¹²/л).

Процесс повышения выработки эритроцитов в крови птиц всех групп прогрессировал по срокам опыта, но при этом данные по 2-й и 3-й группам во все сроки исследований были выше, чем в контроле, а данные птиц 4-й группы, напротив, имели тенденцию к снижению. К 30-м суткам исследований показатели птиц 2-й и 3-й групп были выше контрольной цифры в 1,08 и 1,19 раза (0,3 и 0,7·10¹²/л), тогда как уровень эритроцитов в крови птиц 4-й группы уступал их значениям в крови перепелов 1-й, 2-й и 3-й групп — в 1,19; 1,29 и 1,42 раза (на 0,6; 0,9 и 1,3·10¹²/л).

Значительное повышение уровня эритроцитов отмечалось к 45-м суткам опыта. На этом сроке исследований уровень эритроцитов в крови перепелов 2-й и 3-й групп был выше, чем у птиц 1-й группы, в 1,1 и 1,17 раза (на 0,4 и 0,7·10¹²/л), тогда как уровень эритроцитов в крови перепелов 4-й группы был ниже контрольной цифры в 1,38 раза (на 1,1·10¹²/л).

Таблица 1

Влияние разных доз ЭПП на динамику эритроцитов, гемоглобина в крови и значение гематокрита у перепелов

Cроки опыта
(сут./возраст)

Группы

Стат. показатель

Показатели, единица измерения

Эритроциты

10¹²/л

Гемоглобин

10¹²/л

Гематокрит

%

7/22

1-я

M±m

2,7±0,3

120±7,1

38,4

Cv, %

5,8

6,0

1,6

2-я

M±m

2,7±0,5

125±6,8

40±6,0

Cv, %

19

10,0

15,1

3-я

M±m

2,9±0,2

136,4±13,1

42,6±4,2

Cv, %

8,3

9,6

9,8

4-я

M±m

2,5±0,3

115,6±9,8

34,2±1,6

Cv, %

12,2

7,9

4,7

14/30

1-я

M±m

3,4±0,4

127,8±5,1

42,4±3,7

Cv, %

11,2

4

8,7

2-я

M±m

3,9±0,4

136,2±10

44,4±5,9

Cv, %

11,5

7,3

13,2

3-я

M±m

4,2±0,5

145,7±4,1

46,2±1,35

Cv, %

12,7

2,8

2,9

4-я

M±m

2,6±0,4

110,4±9,8

32,3±1,8

Cv, %

13,6

8,9

5,6

30/45

1-я

M±m

3,7±1,1

135,6±2,8

45,3±8,2

Cv, %

31

2,1

18,1

2-я

M±m

4±0,4

148,7±11,7

47,5±5,8

Cv, %

10,5

7,9

12,2

3-я

M±m

4,4±0,5

155,3±1,5

49,6±7,8

Cv, %

11,6

0,9

15,8

4-я

M±m

3,1±0,6

120,5±7,15

30±3,6

Cv, %

17,8

5,9

12,2

45/60

1-я

M±m

4,0±0,3

142,8±6,6

46,7±8,9

Cv, %

7,3

4,6

19,1

2-я

M±m

4,4±0,4

152,9±14,2

48,2±8,7

Cv, %

9,5

9,3

18,0

3-я

M±m

4,7±0,4

159,4±3,6

49,9±9,1

Cv, %

7,5

2,3

18,3

4-я

M±m

2,9±0,2

131,2±4,3

33,0±6,1

Cv, %

7,7

3,3

18,3

60/75

1-я

M±m

4,1±0,5

140,4±17,1

46,5±7,2

Cv, %

12,1

12,2

15,6

2-я

M±m

4,6±0,2

150,2±11,8

50,6±9,1

Cv, %

3,8

7,9

18,0

3-я

M±m

4,9±0,2

157,1±13,5

54,4±5,6

Cv, %

3,8

8,9

10,3

4-я

M±m

3,2±0,6

126,3±4,0

34,8±7,6

Cv, %

19,8

3,2

21,7

210/225

1-я

M±m

4,0±0,3

138,6±13,8

46,8±4,2

Cv, %

7,3

10,0

8,9

2-я

M±m

4,6±0,7

152,2±4,3

50,2±6,6

Cv, %

15,1

2,8

13,1

3-я

M±m

4,9±0,1

156,4±5,6

53,8±5,4

Cv, %

3,0

3,6

10,1

4-я

M±m

3±0,7

127,2±1,6

38,1±7,8

Cv, %

21,6

1,3

20,1

Примечание: 1-я группа — контроль, 2-я группа — низкие дозы, 3-я группа — средние дозы, 4-я группа — высокие дозы. Р≤0,05.

Максимальная продукция красным костным мозгом птиц эритроцитов регистрировалась на 60-е сутки опыта. К этому периоду показатели содержания эритроцитов в крови перепелов 2-й и 3-й групп были выше, чем в контроле, в 1,12 и 1,7 раза (на 0,5 и 0,8·10¹²/л), а уровень эритроцитов в крови перепелов 4-й группы в 1,28 раза (на 0,9·10¹²/л) был ниже контрольного значения.

В последующие сроки исследований особых колебаний в содержании эритроцитов в крови перепелов контрольной и опытных групп не регистрировалось по сравнению с предыдущим сроком опыта. К 225-дневному возрасту уровень эритроцитов в крови перепелов 2-й и 3-й групп продолжал превышать показатель контрольных птиц 1-й группы в 1,15 и 1,22 раза (на 0,6 и 0,9·10¹²/л), а данные по перепелам 4-й группы уступали контролю в 1,33 раза (на 1,0·10¹²/л).

Уровень гемоглобина (таблица 1) на 7-е сутки от начала дачи с питьевой водой птицам ЭПП имел заметные колебания по группам, в сравнении с показателями птиц контрольной группы. На этом сроке опыта его содержание колебалось по группам в пределах 115,6–136,4 г/л. Во 2-й и 3-й группах он превысил показатель птиц 1-й группы в 1,04 и 1,13 раза (на 5,0 и 16,4 г/л), а в 4-й группе уступал ему в 1,04 раза (на 4,4 г/л).

Эта тенденция продолжалась до конца опытов. К 14, 30, 45, 60 и 210-м суткам исследований уровень гемоглобина в крови птиц 2-й и 3-й опытных групп был выше, чем в контрольной группе, в 1,06 и 1,14 раза (на 8,4 и 17,9 г/л), в 1,09 и 1,14 раза (на 13,1 и 19,7 г/л), в 1,07 и 1,12 раза (на 10,1 и 16,6 г/л), в 1,07 и 1,12 раза (на 9,8 и 16,7 г/л), в 1,1 и 1,13 раза (на 13,6 и 17,8 г/л), а показатели содержания гемоглобина в крови перепелов 4-й группы во все сроки эксперимента были ниже, чем значения у птиц 1-й, контрольной группы, соответственно, в 1,15; 1,12;1,08; 1,11 и 1,08 раза (на 17,4; 15,6; 11,6; 14,1 и 11,4 г/л).

Колебания в содержании эритроцитов и гемоглобина отражались и на уровне гематокрита в крови перепелов. Его значение к 7-м суткам опыта по 1–4 группам колебалось на уровне 34,2–42,6%. При этом гематокрит у птиц 2-й и 3-й групп был выше, чем у контрольных перепелов 1-й группы, в 1,04 и 1,1 раза (на 1,6 и 4,2%), а данные по 4-й группе — ниже, чем в контроле, в 1,12 раза (на 4,2%).

Показатели гематокрита в крови перепелов 2-й и 3-й групп в последующие сроки опыта (14, 30, 45, 60, 210-е сутки) были выше, чем у птиц 1-й, контрольной группы, в 1,05 и 1,09 раза (на 2,0 и 3,8%); в 1,05 и 1,09 раза (на 2,2 и 4,3%); 1,03 и 1,07 раза (на 1,5 и 3,2%); в 1,09 и 1,17 раза (на 4,1 и 7,9%); в 1,07 и 1,15 раза (на 3,4 и 7,0%). Значение гематокрита у перепелов 4-й группы на этом сроке исследований было ниже контрольной цифры в 1,31 раза (на 10,1%); в 1,51 раза (на 15,3%); в 1,41 раза (на 13,7%); в 1,33 раза (на 11,7%); в 1,23 раза (на 8,7%).

Данные по изучению влияния низкой, средней и высокой доз ЭПП на содержание в крови перепелов эритроцитов, гемоглобина и на показатель гематокрита свидетельствуют о том, что низкие дозы способствуют умеренной активизации процессов гемопоэза, средние дозы вызывают значительную ее активизацию, а высокие — вызывают его затормаживание.

Результаты исследования влияния разных доз ЭПП на изменения содержания в крови перепелов лейкоцитов и тромбоцитов представлены на рисунке 1. Содержание лейкоцитов в крови перепелов опытных групп уже с 7-х суток эксперимента имело отличия по сравнению с данными 1-й, контрольной группы. На этот срок опыта уровень лейкоцитов в крови перепелов 2-й и 3-й групп превысил контрольное значение в 1,04 и 1,05 раза (на 1,3 и 1,4·10⁹/л), а их уровень в крови птиц 4-й группы был ниже, чем в контроле, в 1,32 раза (на 6,5·10⁹/л).

Уровень лейкоцитов в крови перепелов контрольной и опытных групп в последующие сроки опытов повышался в возрастном аспекте. Но данные птиц 2-й и 3-й опытных групп во все последующие сроки исследований были достоверно выше его значения у птиц 1-й, контрольной группы: к 14-му дню — в 1,07 и 1,14 раза (на 2,4 и 4,6·10⁹/л), к 30-му дню — в 1,04 и 1,09 раза (на 1,4 и 3,4·10⁹/л), к 45-му дню — в 1,06 и 1,16 раза (на 2,2 и 6,2·10⁹/л), к 60-му дню — в 1,07 и 1,2 раза (на 2,8 и 8,0·10⁹/л), к 210-му дню — в 1,05 и 1,18 раза (на 2,0 и 6,9·10⁹/л).

Выпаивание с водой перепелам высоких доз ЭПП (4-я группа) способствовало снижению уровня лейкоцитов в крови. Этот процесс выраженно проявлялся с первых сроков исследований и к 7, 14, 30, 45, 60 и 210-м суткам опыта содержание лейкоцитов в крови 4-й группы было ниже, чем в контроле, в 1,32 раза (на 6,5·10⁹/л), в 1,39 раза (на 9,1·10⁹/л), в 1,57 раза (на 13,0·10⁹/л), в 1,54 раза (на 13,2·10⁹/л), в 1,44 раза (на 11,9·10⁹/л), в 1,46 раза (на 12,0·10⁹/л).

Рис. 1. Влияние разных доз ЭПП на динамику изменения содержания в крови перепелов а) лейкоцитов и б) тромбоцитов. Обозначения: 1-я группа — контрольная, 2-я группа — низкие дозы, 3-я группа — средние, 4-я группа — высокие дозы.

Содержание тромбоцитов в крови перепелов через 7 суток от начала выпаивания ЭПП имело заметные колебания: 95,2–115,7·10⁹/л.

Максимальный уровень тромбоцитов во все сроки опытов отмечался в крови перепелов 3-й группы (средние дозы ЭПП).

К 7-м суткам эксперимента уровень тромбоцитов в крови перепелов 3-й группы был выше его значения у птиц 1-й, 2-й и 4-й групп, соответственно, в 1,06; 1,02 и 1,21 раза (на 6,4; 1,9 и 20,5·10⁹/л); к 14-м суткам — в 1,05; 1,02 и 1,17 раза (на 6,1; 2,2 и 18,1·10⁹/л), к 30-м суткам — в 1,12;1,01 и 1,19 раза (на 13,9; 1,7 и 21,1·10⁹/л), к 45-м суткам — в 1,1; 1,01 и 1,14 раза (на 13,2; 1,7 и 16,4·10⁹/л), к 60-м суткам — в 1,1; 1,01 и 1,16 раза (на 11,8; 1,3 и 18,9·10⁹/л), к 210-м суткам — в 1,06; 1,01 и 1,17 раза (на 8,0; 1,6 и 19,0·10⁹/л).

Данные по исследованию влияния разных доз ЭПП на динамику показателей лейкограммы (базофилов, эозинофилов, псевдоэозинофилов, лимфоцитов и моноцитов) в крови перепелов представлены в таблице 2.

Таблица 2

Влияния разных доз ЭПП на динамику показателей лейкограммы в крови перепелов

Срок опыта

(сут./ возр.)

Группы

Статистическ.

показатель

Показатели, единица измерения

Базофилы,
%

Эозинофилы,
%

Псевдо-эозинофилы, %

Лимфоциты, %

Моноциты, %

7/22

1-я

M±m

0,1±0

2,6±0,3

28±3,2

46,9±2,8

1,7±0,1

Cv, %

0

12,2

11,3

6

5

2-я

M±m

0,1±0,04

2,9±0,2

29,5±2,6

49,7±2,5

1,8±0,1

Cv, %

37,3

7,7

8,8

5,1

3,9

3-я

M±m

0,2±0,07

3,4±0,2

30,4±2,6

54±2,1

1,9±0,1

Cv, %

35,4

4,7

8,6

4,0

6,13

4-я

M±m

0

2,2±0,2

26±3

42±1,2

1,6±0,2

Cv, %

0

8,5

11,5

2,9

12,6

14/28

1-я

M±m

0,1±0,04

3,0±0,3

30,6±2,1

50,5±3

1,9±0,2

Cv, %

35,4

9,7

7,0

5,9

8,3

2-я

M±m

0,3±0,04

3,9±0,2

32,2±1,8

56,7±1,8

2,1±0,1

Cv, %

16,0

4,8

5,6

3,1

5,3

3-я

M±m

0,3±0,07

4,0±0,1

34,4±1,6

64,8±1,5

2,2±0,2

Cv, %

23,6

2,5

4,5

2,3

7,2

4-я

M±m

0,1±0,04

2,4±0,2

20,7±1,6

48,2±1,4

1,7±0,2

Cv, %

35,4

6,6

7,8

2,9

9,3

30/45

1-я

M±m

0,1±0,04

3,1±0,2

32,3±1,3

54,6±4,1

2,1±0,2

Cv, %

35,4

7,2

3,9

7,6

7,5

2-я

M±m

0,3±0,06

4,1±0,1

34,0±1,1

67±1,5

2,3±0,2

Cv, %

20,4

3,0

3,2

2,2

7,6

3-я

M±m

0,3±0,06

4,9±0,2

35,8±1,1

72,3±2,1

2,5±0,2

Cv, %

20,4

3,2

3,2

2,9

6,3

4-я

M±m

0

2,7±0,2

27,2±0,8

43,6±1,6

1,8±0,2

Cv, %

0

8,3

3,1

3,8

8,8

45/60

1-я

M±m

0,15±0,05

3,4±0,2

34,2±1,5

58,0±1,3

2,4±0,1

Cv, %

33,3

4,7

4,3

2,3

3,5

2-я

M±m

0,3±0,06

4,8±0,2

46±0,8

72,6±0,9

2,5±0,1

Cv, %

20,4

3,3

1,7

1,3

4,9

3-я

M±m

0,4±0,07

5,0±0,1

47,8±1,0

74,5±0,8

2,7±0,1

Cv, %

17,7

1,7

2,0

1,1

4,3

4-я

M±m

0,1±0,06

3,1±0,2

32,3±1,2

45,3±1,1

2,0±0,1

Cv, %

61,2

5,1

3,9

2,34

6,6

60/75

1-я

M±m

0,15±0,05

3,6±0,1

34,6±0,9

60,2±1,3

2,4±0,2

Cv, %

33,3

3,2

2,6

2,1

6,6

2-я

M±m

0,3±0,05

4,9±0,2

46,7±1,6

74,5±0,7

2,6±0,1

Cv, %

14,0

3,2

3,3

1,0

4,5

3-я

M±m

0,4±0,04

5,1±0,2

49,3±1,4

77,5±0,7

2,9±0,2

Cv, %

10,4

3,7

2,9

0,9

5,4

4-я

M±m

0,1±0,04

3,2±0,1

36,0±1,4

57,5±1,9

2,0±0,2

Cv, %

35,4

4,1

3,9

3,2

7,9

210/225

1-я

M±m

0,15±0,05

3,4±0,2

33,4±1,7

62,0±1,2

2,3±0,1

Cv, %

33,3

6,9

5,2

2,0

3,1

2-я

M±m

0,4±0,08

4,6±0,1

46,9±1,5

74,8±1,5

2,4±0,1

Cv, %

19,8

2,5

3,3

1,9

4,7

3-я

M±m

0,4±0,06

4,9±0,1

48,0±3,1

78,6±0,8

2,4±0,1

Cv, %

15,3

2,4

6,4

1,1

4,2

4-я

M±m

0,1±0

3,0±0,1

31,4±3,3

58,3±1,4

1,9±0,2

Cv, %

0

2,0

10,4

2,1

10,7

Примечание: 1-я группа — контроль, 2-я группа — низкие дозы, 3-я группа — средние дозы, 4-я группа — высокие дозы. Р≤0,05.

Содержание базофилов в крови перепелов контрольной группы во все сроки опытов не превышало уровня 0,1–1,5%.

К 7-м суткам от начала эксперимента уровень базофилов в крови перепелов 1-й и 2-й групп не изменялся, в крови птиц 4-й группы они не выявлялись. В крови перепелов 3-й группы содержание базофилов составило 0,2%. В последующие сроки опыта содержание базофилов в крови перепелов 1-й и 4-й групп было на одинаковом уровне — 0,1–0,15%. Уровень базофилов в крови перепелов 2-й и особенно 3-й группы был выше этих значений в 3–4 раза (0,3–4%).

Уровень содержания эозинофилов в крови перепелов под влиянием разных доз ЭПП также изменялся в зависимости от дозы препарата. Самое высокое содержание эозинофилов регистрировалось в крови птиц 3-й группы. Так, через 7 суток после начала выпаивания ЭПП эозинофилы в крови птиц 3-й группы превысили показатели перепелов по 1-й, 2-й и 4-й группам в 1,3; 1,17 и 1,54 раза (на 0,8; 0,5 и 1,2%), через 14 суток — в 1,33; 1,02 и 1,66 раза (на 1,0; 0,1 и 1,6%), через 30 суток — в 1,58; 1,19; 1,81 раза (на 1,8; 0,8; 2,2%), через 45 суток — в 1,47; 1,04 и 1,61 раза (на 1,6; 0,2 и 1,9%), через 60 суток — в 1,41; 1,04 и 1,59 раза (на 1,5; 0,2 и 1,9%).

Средние дозы ЭПП способствовали значительной активизации в организме перепелов псевдоэозинофилов. К 7-м суткам от начала опыта содержание псевдоэозинофилов в крови птиц 3-й группы было, выше по сравнению с их количеством в крови перепелов 1-й, 2-й и 4-й групп, в 1,08; 1,03 и 1,16 раза (на 2,4; 0,9 и 4,4%), на 14-е сутки — в 1,12; 1,06 и 1,66 раза (на 3,8; 2,2 и 13,7%), на 30-е сутки — в 1,1; 1,05 и 1,31 раза (на 3,5; 1,8 и 8,6%), на 45-е сутки — в 1,39; 1,04 и 1,48 раза (на 1,8; 1,8 и 15,5%), на 60-е сутки — в 1,42; 1,42 и 1,37 раза (на 14,7; 2,6 и 13,3%), на 210-е сутки — в 1,44; 1,02 и 1,53 раза (на 14,6; 1,1 и 16,6%).

Особо заметные реакции под влиянием разных доз ЭПП отмечались со стороны лимфоцитов. Значительная активизации лимфоцитов регистрировалась под влиянием средних доз ЭПП. К 7-м суткам от начала выпаивания перепелам ЭПП содержание лимфоцитов в крови перепелов 3-й группы превысило показатели птиц 1-й, 2-й и 4-й групп в 1,15; 1,09 и 1,28 раза (на 7,1; 4,3 и 12,0%).

В последующие сроки опыта отмечалось повышение уровня лимфоцитов в крови перепелов как в возрастном аспекте, так и от действия ЭПП. Самые выраженные реакции отмечались под влиянием средних доз ЭПП.

На 14-е сутки опыта содержание лимфоцитов в крови перепелов 3-й группы было выше его уровня в крови птиц 1-й, 2-й и 4-й групп в 1,28; 1,14 и 1,34 раза (на 14,3; 8,1и 16,6%), на 30-й день — в 1,32; 1,08 и 1,66 раза (на 17,7; 5,3 и 28,7%), на 45-е сутки — в 1,28; 1,03 и 1,64 раза (на 16,5; 1,9 и 29,2%), на 60-й день — в 1,28; 1,04 и 1,34 раза (на 17,3; 3,0 и 20,0%). До конца опытов (210-е сутки) содержание лимфоцитов в крови птиц 3-й группы было выше их значения в крови перепелов 1-й, 2-й и 4-й групп — в 1,26; 1,05 и 1,35 раза (на 16,6; 3,8 и 20,3%).

Подобно динамике лимфоцитов, изменялась в крови перепелов контрольной и опытных групп динамика моноцитов. К 7-м суткам от начала опытов содержание моноцитов в крови перепелов 3-й группы было выше их уровня в крови птиц 1-й, 2-й и 4-й групп в 1,12; 1,05 и 1,18 раза (на 0,2; 0,1 и 0,3%), к 14-м суткам — в 1,16; 1,04 и 1,29 раза (на 0,3; 0,1 и 0,5%), к 30-м суткам — в 1,19; 1,08 и 1,39 раза (на 0,4; 0,2 и 0,7%), к 45-м суткам — в 1,12; 1,08 и 1,35 раза (на 0,3; 0,2 и 0,7%), к 60-м суткам — в 1,2; 1,11 и 1,45 раза (на 0,5; 0,3 и 0,9%). К концу опыта уровень моноцитов в крови перепелов 2-й и 3-й групп был на одинаковом уровне, превысив контрольную цифру лишь в 1,04 раза, а содержание моноцитов в крови птиц 4-й группы к этому сроку исследования было в 1,26 раза ниже по сравнению с данными по 2-й и 3-й группам.

Заключение. Низкие дозы экстракта пчелиного подмора оказывают на организм перепелов умеренное стимулирующее эритропоэз- и лейкопоэз-действие. Показатели лейкограммы птиц 2-й группы лишь незначительно превышают данные перепелов 1-й, контрольной группы. Средние дозы вызывают выраженную активизацию и повышение в крови перепелов эритроцитов, гемоглобина и увеличение показателя гематокрита; способствуют увеличению уровня в крови, до высшей границы физиологических норм, лейкоцитов, тромбоцитов, лимфоцитов, моноцитов, а также зернистых клеток: базофилов, эози-нофилов и псевдоэозинофилов.

Высокие дозы ЭПП оказывают на состояние гемопоэза и лейко-поэза некоторое затормаживающее влияние, что обусловлено его высокой биологической активностью, и поэтому дозы ЭПП должны быть строго дозированы. Следовательно, применение ЭПП для коррекции гемопоэза и лейкопоэза в организме перепелов наиболее эффективно в средних дозах.

3.2 Влияние экстракта пчелиного подмора на состояние иммунной системы и показатели иммунного ответа в организме перепелов

3.2.1 Влияние разных доз ЭПП на динамику показателей естественной резистентности и фагоцитоза перепелов

Результаты изучения влияния разных доз ЭПП на состояние динамики бактерицидной активности сыворотки крови птиц представлены на рисунке 2.

Исследования показателей естественной резистентности перепелов и фагоцитарной активности псевдоэозинофилов крови проводились на 14, 30, 45, 60, 90 и 210-е сутки от начала опыта.

Бактерицидная активность сыворотки крови перепелов к 14-м суткам от начала эксперимента имела достоверные различия по группам. Максимальное значение его, регистрируемое на этом сроке опыта, отмечалось по 3-й группе — 45,4±3,1, было выше показателей 1-й, 2-й и 4-й групп в 1,2; 1,12 и 1,77 раза (на 7,64,8 и 19,8%).

Рис. 2. Динамика бактерицидной активности сыворотки перепелов.

В последующие сроки исследований (30, 45 и 60-е сутки) бактерицидная активность сыворотки крови перепелов 3-й группы продолжала превышать показатели контроля (1-й группы) и 2-й, 4-й групп. На 30-е сутки эксперимента эта разница была в 1,23; 1,12 и 1,72 раза (на 11,4; 6,7 и 25,2%), на 45-е сутки — в 1,25; 1,16 и 1,87 раза (на 14,1; 9,7 и 32,4%), на 60-е сутки — в 1,27; 1,18 и 1,91 раза (на 16,0;11,4 и 36,1%); на 90-е сутки — в 1,49; 1,16 и 1,76 раза (на 26,2; 10,8 и 34,2%). К 210-м суткам опыта по всем группам наблюдалось снижение показателя бактерицидной активности сыворотки крови перепелов, по сравнению с ее значением на предыдущем сроке эксперимента (90 дней). Однако, как и во все предыдущие сроки исследований, максимальное значение БАСК отмечалось у перепелов 3-й группы, незначительно уступали этой цифре показатели БАСК птиц 2-й группы — в 1,17 раза (на 20,2%). Значительно ниже были показатели птиц 1-й, контрольной группы — в 1,4 раза (на 10,3%).

Минимальный показатель БАСК перепелов к концу опыта отмечался по 4-й группе. Данный показатель был ниже по сравнению с данными по 1-й, 2-й и 3-й группам, соответственно, в 1,19; 1,42 и 1,67 раза (на 8,1; 18,0 и 28,3%).

В процессе эксперимента под влиянием разных доз ЭПП, подобно БАСК, изменялась динамика лизоцимной активности сыворотки крови (ЛАСК) перепелов (таблица 3).

Таблица 3

Влияние разных доз ЭПП на динамику лизоцимной активности сыворотки крови перепелов (в %)

Группы

Стат.

показатель

Сроки опыта (сутки/возраст)

14/28

30/45

45/60

60/75

90/105

210/215

Показатели ЛАСК

1-я

М

13,9

15,4

18,2

16,4

17,0

17,8

±m

1,5

1,6

1,3

1,4

2,6

1,6

Сv, %

10,9

9,0

7,2

8,4

15,0

9,1

P

*

*

*

*

*

2-я

М

16,5

17,3

20,8

21,7

21,4

19,7

±m

1,7

1,6

3,1

2,7

1,4

1,3

Сv, %

9,8

7,2

14,8

8,4

6,6

6,5

Р

*

*

*

*

*

3-я

М

19,6

21,9

25,6

25,9

22,9

23,6

±m

1,5

1,6

1,4

2,8

1,9

3,4

Сv, %

7,5

7,2

5,6

10,7

8,3

14,2

Р

*

*

*

*

*

4-я

М

8,1

10,6

12,9

14,2

16,3

15,8

±m

1,2

1,4

1,6

1,3

1,2

1,6

Сv, %

14,5

13,3

12,3

9,1

7,2

10,0

Р

*

*

*

*

*

Примечание: 1-я группа — контроль, 2-я группа — низкие дозы, 3-я группа — средние дозы, 4-я группа — высокие дозы. Р≤0,05.

Самого высокого значения ЛАСК достигла во все сроки опыта по 4-й группе. К 14-м суткам опыта описываемый показатель был выше его значения у перепелов 1-й, контрольной и 2-й, 4-й опытных групп в 1,41; 1,19 и 2,42 раза (на 5,7; 3,1 и 11,5%), к 30-м суткам — в 1,42; 1,26 и 2,06 раза (на 6,5; 4,6 и 11,3%), к 45-м суткам — в 1,4; 1,23 и 1,98 раза (на 7,4;4,8 и 12,7%), к 60-м суткам — в 1,58; 1,19 и 1,82 раза (на 9,5; 4,2 и 11,7%), к 90-м суткам — в 1,34; 1,07 и 1,4 раза (на 5,9; 1,5 и 6,6%). К концу эксперимента, на 210-е сутки, показатель ЛАСК перепелов не имел выраженных изменений по сравнению с его значением в предыдущий срок эксперимента. На этом сроке значение ЛАСК птиц всех групп стабилизировалось и оставалось примерно на уровне его значения в предыдущий срок эксперимента — 90 суток.

Данные по 3-й группе к концу опыта продолжали оставаться максимальными и превышали показатели птиц 1 и 2, 4-й групп в 1,32; 1,19 и 1,49 раза (на 5,8; 3,9 и 7,8%).

Разные дозы ЭПП (рисунок 2, таблица 3) оказывают заметное влияние не только на показатели гуморального звена иммунитета (БАСК и ЛАСК), но и на динамику клеточного звена иммунитета — фагоцитарную активность (ФА) псевдоэозинофилов крови перепелов (таблица 4).

Таблица 4

Динамика фагоцитарной активности (ФА) псевдоэозинофилов перепелов под влиянием разных доз ЭПП (в %)

Группы

Стат. показатель

Сроки опыта, сут./возраст

14/28

30/45

45/60

60/75

90/105

210/225

ФА псевдоэозинофилов

1-я

М

36,5

42,6

46,5

47,4

50,2

49,3

±m

1,5

1,0

5,2

2,0

2,3

3,2

Сv, %

4,0

2,2

11,2

4,2

4,5

6,7

2-я

М

38,9

44,8

49,0

52,5

55,6

58,7

±m

3,0

1,7

7,1

1,4

3,5

3,5

Cv, %

7,8

3,8

14,4

2,6

6,3

6,0

Р

***

***

***

*

**

*

3-я

М

44,6

49,7

54,5

59,7

58,7

62,3

±m

1,8

2,2

2,0

6,8

4,5

1,8

Cv, %

4,1

4,4

3,7

11,4

7,7

3,0

Р

*

*

**

*

*

*

4-я

М

21,3

23,0

24,6

28,8

30,2

36,4

±m

2,4

1,4

1,2

2,1

4,0

2,7

Cv, %

11,1

6,1

5,0

7,5

13,2

7,5

Р

*

*

*

*

*

*

Примечание: 1-я группа — контроль, 2-я группа — низкие дозы, 3-я группа — средние дозы, 4-я группа — высокие дозы.

Изменение ФА псевдоэозинофилов в крови перепелов наблюдалось уже с 14-х суток исследований. К этому периоду регистрировалось неоднозначное значение данного показателя. Максимальный уровень ФА псевдоэозинофилов отмечался у перепелов 3-й группы. Эта тенденция сохранилась в продолжение всего опыта. На 14-е сутки ФА псевдоэозинофилов птиц 3-й группы была выше ее значения у птиц 1-й, 2-й и 4-й групп в 1,22; 1,14 и 2,09 раза (на 8,1; 5,7 и 23,3%), на 30-е сутки — в 1,16; 1,1 и 2,16 раза (на 7,1; 4,9 и 26,7%), на 45-е сутки — в 1,17; 1,11 и 2,21 раза (на 8,0;5,5 и 29,9%), на 60-е сутки — в 1,26; 1,14 и 2,07 раза (на 12,3; 7,2 и 30,5%), на 90-е сутки — в 1,17; 1,05 и 1,94 раза (на 8,5; 3,1 и 28,5%), на 210-е сутки — в 1,26; 1,06 и 1,71 раза (на 13,0; 3,6 и 25,9%).

Следовательно, разные дозы ЭПП оказывают разное действие на показатели гуморального и клеточного звена иммунитета перепелов. Низкие дозы способствуют умеренному повышению в организме птиц бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности псевдоэозинофилов крови. Средние дозы вызывают выраженное повышение БАСК и ЛАСК и ФА псевдоэозинофилов крови и способствуют их длительному сохранению на высоком уровне, обуславливая высокий иммунный статус организма птиц. Высокие дозы, значительно превышающие допустимые значения, напротив, затормаживают механизмы естественной иммунной защиты в организме перепелов.

3.2.2 Влияние разных доз ЭПП на динамику иммуноцитологических показателей в миелограмме перепелов

Результаты исследования динамики изменения содержания клеток в мазках — отпечатках из красного костного мозга перепелов представлены в таблице 5, на рисунке 3.

Исследования миелограммы и спленограммы птиц проводили на 14, 30, 45, 60 и 210-е сутки опытов.

К 14-м суткам исследований в миелограмме перепелов контрольной и опытных групп регистрировались выраженные изменения в показателях клеток зернистого ростка лейкоцитов. К этому периоду опыта максимальное содержание клеток зернистого ростка лейкоцитов отмечалось в препаратах из костного мозга перепелов 3-й группы. Они составили 34,4% и превысили их уровень у птиц 1-й, 2-й и 4-й групп в 1,41; 1,24 и 1,88 раза (на 10,1; 6,8 и 16,1%).

К 30-м суткам от начала опытов содержание клеток зернистого ростка лейкоцитов в красном костном мозге перепелов 3-й группы было выше их значения у птиц 1-й, 2-й и 4-й групп в 1,59; 1,06 и 2,11 раза (на 15,8; 2,6 и 22,2%), к 45-м суткам — в 1,74; 1,07 и 2,35 раза (на 18,3;3,7 и 29,7%), к 60-м суткам — в 1,78; 1,06 и 2,26 раза (на 25,6; 3,4 и 32,5%). До конца опытов красный костный мозг перепелов 2-й и 3-й опытных групп отвечал, в разной степени активности, выраженной выработкой клеток зернистого ростка лейкоцитов. К этому периоду опыта уровень клеток зернистого ростка лейкоцитов в мазках из костного мозга перепелов 3-й группы был выше их значения у птиц 1-й, 2-й и 4-й групп в 1,87; 1,06 и 2,0 раза.

Таблица 5

Влияние разных доз ЭПП на динамику показателей миелограммы перепелов

Cроки опыта (сут./возраст)

Группы

Показатели

Клетки зернистого ростка, %

Лимфоидные клетки, %

Клетки эритроидного ростка, %

(М±m(Сv, ℅)

(М±m(Cv, ℅)

(М±m(Cv, ℅)

14/28

1-я

24,3±1,7 (7,0)

8,0±0,2(2,0)

26,4±0,8 (3,0)

2-я

27,6±0,7 (2,5)

9,2±1,1 (12,3)

28,9±1,7 (6,0)

3-я

34,4±2,4 (7,1)

10,6±1,1 (10,1)

32,6±1,7 (5,2)

4-я

18,3±0,9 (4,8)

6,1±0,9 (15,3)

16,7±1,3 (8,2)

30/45

1-я

26,4±1,6 (6,0)

10,6±0,9 (8,7)

28,6±1,8 (6,3)

2-я

39,6±2,0 (5,2)

11,3±1,1 (9,8)

30,4±1,7 (5,7)

3-я

42,2±1,4 (3,3)

16,0±1,7 (10,8)

36,9±1,7 (4,7)

4-я

20,0±1,6 (7,9)

7,2±1,1 (15,2)

19,0±1,6 (8,4)

45/60

1-я

29,7±1,6 (5,3)

11,9±0,94 (8,0)

30,0±1,7 (5,7)

2-я

48,0±1,9 (4,0)

14,6±1,6 (10,8)

33,8±1,1 (3,3)

3-я

51,7±2,1 (4,1)

18,5±2,0 (10,7)

38,6±1,5 (3,9)

4-я

22,0±1,6 (7,1)

8,6±0,7 (7,6)

22,2±1,6 (7,1)

60/75

1-я

32,6±1,6 (4,9)

12,0±0,9 (7,6)

31,7±1,5 (4,9)

2-я

54,8±0,7 (1,3)

16,7±1,0 (6,1)

34,0±1,6 (4,7)

3-я

58,2±1,4 (2,3)

18,9±1,7 (8,8)

42,7±2,2 (5,1)

4-я

25,7±1,6 (6,2)

8,2±0,3 (3,9)

21,6±1,7 (7,8)

210/225

1-я

30,3±1,3 (4,4)

12,2±0,8 (6,7)

30,4±1,5 (4,9)

2-я

53,4±2,3 (4,4)

16,0±1,6 (10,1)

32,5±1,6 (5,