Р. Т. Маннапова

Микробиология и микология. Особо опасные инфекционные болезни, микозы и микотоксикозы

Учебник

Издание второе,
переработанное и дополненное

ebooks@prospekt.org

Информация о книге

УДК 619:579(075.8)

ББК 48.7:28.4я73

М23

В оформлении обложки использованы изображения: grebcha, Dusan Petkovic, W_NAMKET, Dr. Norbert Lange, Rattiya Thongdumhyu, science photo, OlgaReukova, Lesny Ludek, Jarabogu, Stastny_Pavel, Have a nice day Photo, David Litman, Komsan Loonprom, Konstantin Kolosov, Zaharia Bogdan Rares, Arogang, Niraelanor, MyFavoriteTime, Chadsikan Tawanthaisong, Budimir Jevtic, Monika Wisniewska, Red Confidential / Shutterstock.com

Автор:

Маннапова Р. Т.

Рецензенты:

Ларионова О. С., доктор биологических наук, доцент, заведующая кафедрой микробиологии, биотехнологии и химии Саратовского государственного аграрного университета им. Н. И. Вавилова;

Андреева А. В., доктор биологических наук, профессор, заведующая кафедрой инфекционных болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы Башкирского государственного аграрного университета.

Учебник состоит из четырех разделов. Первый раздел содержит подробный материал о возбудителях особо опасных инфекционных болезней животных. Второй раздел посвящен микозам и кормовым микотоксикозам. Они составлены и изложены по единому плану. Третий раздел посвящен микробиологии продуктов животного происхождения. В четвертом разделе ко всем описанным в учебнике инфекционным болезням, микозам и микотоксикозам приведены схемы лабораторной диагностики и их специфической профилактики. В конце книги представлены терминологический словарь, сведения об основоположниках микробиологии и иммунологии и лауреатах Нобелевской премии.

Предназначен для подготовки специалистов с учетом требований программы ФГОС ВО по направлению 36.05.01 «Ветеринария», а также при подготовке магистров/бакалавров по направлению 36.04.01/36.03.01 «Ветеринарно-санитарная экспертиза».

УДК 619:579(075.8)

ББК 48.7:28.4я73

© Маннапова Р. Т., 2018

© Маннапова Р. Т., 2025, с изменениями

© ООО «Проспект», 2025

Посвящается светлой
памяти моих родителей —
Тимергалея Фахразетдиновича
и Нурзиды Динисламовны
Рафиковых

ПРЕДИСЛОВИЕ

Учебник «Микробиология и микология» подготовлен для обучения специалистов с учетом требований программы ФГОС ВО по направлению 36.05.01 «Ветеринария», а также при подготовке магистров/бакалавров по направлению 36.04.01/36.03.01 «Ветеринарно-санитарная экспертиза». Он может быть использован при проведении лабораторно-практических, факультативных занятий, выполнении научных исследований, в нем много внимания отводится самостоятельной работе студентов.

Учебник подготовлен в удобной форме как для студентов, так и для преподавателей дисциплины, ибо составлен с учетом региональных особенностей, современного состояния животноводства в целом по Российской Федерации, а также современных международных требований для подготовки востребованных конкурентоспособных специалистов для сельского хозяйства в условиях рыночной экономики, в частности ветеринарных врачей и ветеринарно-санитарных экспертов. По всем инфекциям, предусмотренным типовой и рабочей программой дисциплины микробиология и микология по направлениям подготовки 36.05.01 «Ветеринария» и 36.04.01/36.03.01 «Ветеринарно-санитарная экспертиза», в учебнике представлены схемы лабораторной диагностики и специфической профилактики инфекционных болезней, микозов и микотоксикозов. Учебник поможет студентам в изучении возбудителей особо опасных инфекционных болезней, микозов и микотоксикозов, лучшем освоении материалов, выносимых на лабораторно-практические занятия и на самостоятельное изучение. Все изложенные болезни оформлены по общей схеме: определение болезни, возбудитель, его морфология, культуральные, биохимические, токсигенные и антигенные свойства, патогенность и патогенез, устойчивость, диагностика, дифференциальная диагностика, патологическая анатомия, лечение, иммунитет и специфическая профилактика.

Учебник составлен в классическом стиле, для наглядности снабжен иллюстрациями (в виде цветных и черно-белых фотографий, электроннограмм) и таблицами, отражающими краткие сводки по ключевым аспектам инфекционных болезней животных, микозов и микотоксикозов. Надеемся, что он в той или иной степени удовлетворит запросы студентов, аспирантов и преподавателей, научных сотрудников, всех, кому он адресован.

Автор выражает искреннюю благодарность рецензентам за ценные замечания и пожелания по улучшению учебника и всем, кто оказал содействие в его подготовке.

Ваши замечания и пожелания присылайте по адресу: 127434, г. Москва, ул. Тимирязевская, 49, Российский государственный аграрный университет – МСХА имени К. А. Тимирязева, кафедра микробиологии и иммунологии, Р. Т. Маннаповой.

Раздел I
ОСОБО ОПАСНЫЕ ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ

Глава 1. ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ КОККИ

1.1. Возбудители стафилококкозов животных

Стафилококкозы — бактериальные инфекции, характеризующиеся гноеродными процессами различной этиологии, вызванными патогенными стафилококками.

Стафилококк обнаружен Р. Кохом¹ (1878), выделен из гноя фурункула человека Л. Пастером (1880), обстоятельно изучен Ф. Розенбахом (1884).

Стафилококки подразделяются на три вида: Staphilococcus аureus — патогенные; S. epidermidis — условно патогенные, постоянные обитатели кожи и слизистых оболочек; S. Saprophyticus — непатогенные (род Staphylococcus семейство Micrococcaceae).

Патогенные стафилококки проявляются в виде абсцессов, фурункулов, карбункулов, маститов, метритов, пневмонии, сепсиса. Могут вызывать пищевые отравления людей.

Лабораторная диагностика стафилококкозов основана на результатах бактериологического исследования, которая включает бактериоскопию, выделение чистой бактериальной культуры и биопробу.

Для прижизненной диагностики при стафилококкозах в лабораторию направляют раневой экссудат, гной; при маститах — пробы молока. Раневой экссудат, гной берут стерильным ватным тампоном с палочкой, вставляют в стерильную пробирку и упаковывают. Жидкий экссудат, невскрытый абсцесс можно отсосать стерильной иглой со шприцем и слить в стерильную пробирку. При подозрении на сепсис в лабораторию направляют кровь. Для посмертной диагностики направляют кусочки пораженных тканей и органов, кровь.

Морфология. Стафилококки имеют шаровидную форму. Располагаются часто в виде неправильных бессистемных скоплений. В мазках из бульонных культур имеют вид микро- или диплококков, из агаровых культур — расположены в виде скоплений, напоминающих гроздь винограда. Диаметр кокков 0,5–1,5 мкм. Грамположительны (рис. 1.1.1), спор не образуют, особо патогенные штаммы могут образовывать капсулу. Неподвижны.

Рис. 1.1.1. Staphylococcus aureus: 1 — чистая культура, окраска по Граму; 2 — колонии на кровяном агаре; 3 — строение клетки: а — клеточная стенка, б — цитоплазматическая мембрана, в — нуклеоид, г — мембранные структуры внутри нуклеоида; 4 — мазок из патологического материала

Культуральные свойства. Стафилококки хорошо развиваются на обычных питательных средах с рН 7,2–7,4 при температуре 30–37 °С в аэробных и анаэробных условиях (факультативные анаэробы). При загрязнении материала посторонней микрофлорой используют селективные питательные среды: солевой мясо-пептонный агар (МПА), мясо-пептонный бульон (МПБ) с 8–10% хлорида натрия, желточно-солевой агар (ЖСА), 3,5% МПА с добавлением 3 мл 0,1%-ного раствора кристаллвиолета (патогенные стафилококки образуют колонии фиолетового или оранжевого цвета). На МПБ растут интенсивно, вызывают равномерное помутнение среды, образуют рыхлый осадок. Иногда при достаточной аэрации образуют поверхностную пленку. На плотных средах стафилококки растут в виде выпуклых, с ровными краями непрозрачных колоний правильной круглой формы диаметром 2–7 мм. При комнатной температуре, широкой аэрации и рассеянном свете стафилококки вырабатывают золотистые, белые, лимонно-желтые и другие пигменты. Лучшая среда для выделения стафилококка — кровяной агар, где они вызывают гемолиз (рис. 1.2.1).

Биохимические свойства. Применяются для определения патогенно сти стафилококков. Они ферментируют многие углеводы. Штаммы, ферментирующие маннит, являются патогенными (но эта способность нестабильна!). Ферментацию маннита определяют путем посева его на МПБ, содержащий 0,5% маннита, индикатор Андрэдэ + газовки (пробирки Уленгута для улавливания газа). После 1–2-суточной инкубации при температуре 37 °С среда с патогенным штаммом микроба краснеет, в газовках иногда скапливаются пузырьки газа.

Патогенные стафилококки обладают способностью коагулировать плазму крови. Плазмокоагулязную активность определяют в специальной реакции плазмокоагуляции (РПК). Коагулаза — фермент стафилококков, который коагулирует плазму крови. Петлю бактериальной массы исследуемой культуры, снятой с поверхности агаровой среды, смешивают с 0,5 мл плазмы крови кролика (человека), не разведенной или разведенной стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:4, инкубируют при 37 °С. Учет результата через 4 и 24 ч. Положительная реакция — образование сгустка.

Патогенные стафилококки продуцируют фибринолизин. Для выявления фибринолитической способности пробирки с положительными результатами плазмокоагулирования оставляют в термостате на несколько суток. При наличии фибринолизина коагулированная плазма разжижается.

Тест на гемолизин. Исследуемую культуру засевают на чашку Петри с 5%-ном кровяным агаром и инкубируют при 37 °С 24 ч. Лизис эритроцитов проявляется в виде светлой (альфа-гемолиз) или полупрозрачной (бета-гемолиз) зоны вокруг колоний. Гемолитическую активность можно определить путем посева исследуемой культуры в 1–5%-ной кровяной бульон, который после культивирования выделяющего гемолизин микроба становится прозрачным за счет лизиса эритроцитов.

Гемолититическая способность стафилококков бывает не всегда выраженной. Скрытую (потенциальную) способность стафилококков выявляют на 5%-ном кровяном МПА. По диаметру чашки Петри делают прямой полоской посев бета-гемолитического штамма стафилококка. Перпендикулярно этой полоске с двух сторон высевают по 4–5 испытуемых штаммов стафилококков. После суточного инкубирования в непосредственной близости к высеянному по диаметру бета-гемолитическому штамму стафилококка образуется зона гемолиза.

Стафилококки продуцируют лецитиназу. Для ее определения к расплавленному и остуженному до 50–60 °С МПА добавляют взбитые яичные желтки и тщательно перемешивают. После застывания делают посев испытуемой культуры. Лецитиноположительные штаммы стафилококка через 24–48 ч вокруг колоний образуют зону помутнения, окруженную радужным венчиком.

Тест на ДНКазу. Исследуемую культуру засевают «штрихом» на питательную среду с ДНК и культивируют при 37 °С 24 ч. Затем на поверхность среды с бактериальной культурой наливают 1 н. раствор соляной кислоты. Положительный результат — при гидролизе ДНК вдоль «штриха» культуры видна светлая зона (питательная среда с ДНК: в расплавленный МПА добавляют 10%-ный раствор ДНК до конечной 0,2%-ной концентрации, перемешивают, автоклавируют при 120 °С 15 мин и разливают в чашки Петри).

Патогенные стафилококки растут на среде с кристаллвиолетом, не патогенные не растут.

Биопроба, токсигенные свойства. Заражают лабораторных животных для подтверждения токсигенных свойств выделенного стафилококка. Патогенные стафилококки продуцируют несколько токсинов, обладающих разносторонним действием на организм:

• энтеротоксин — при попадании с пищей, с кормом в пищеварительный тракт вызывает пищевую токсикоинфекцию (биопроба на 4–8-недельных котятах, которым с молоком дают бульонную культуру стафилококка, при наличии токсина через 1–2 ч возникают симптомы гастроэнтерита и рвота);

• летальный токсин общего действия — при внутривенном введении бульонной культуры стафилококка кроликам через 15–30 мин наступает смерть животного с признаками острой токсемии: одышка, учащенное сердцебиение, парезы);

• некротический токсин — вызывает некроз тканей (при внутрикожном введении стафилококковой культуры кроликам на месте инъекции развивается омертвение кожи);

• гемотоксин — обладает выраженным гемолитическим действием (лизис эритроцитов); при посеве стафилококков на кровяной агар вокруг колоний образуются обширные зоны гемолиза;

• лейкоцидин — вызывает лизис лейкоцитов, гибель гематобластов костного мозга и нервных клеток;

• в стафилококковых культурах выделен также антикоагулянт, препятствующий свертыванию крови; гемагглютинины;

• стафилококковый экзотоксин, обезвреженный 0,3–0,5% формалином при температуре 37 °С в течение 7–28 суток, при парентеральном введении людям и животным обусловливает синтез специфического антитоксина, способного вступать в реакцию с токсином.

Профилактика: соблюдение зоогигиенических и санитарно-гигиенических условий, устранение витаминной недостаточности, предупреждение травматизма, систематические дезинфекции, своевременная обработка ран.

Схемы лабораторной диагностики и биопрепараты. См. приложения.

1.2. Возбудители стрептококкозов животных

1.2.1. Мастит коров

Стрептококкозы (streptococcosis) — инфекционное заболевание молодняка сельскохозяйственных животных, характеризующееся тяжелыми септическими явлениями, воспалением органов дыхания, желудочно-кишечного тракта и суставов. У взрослых животных проявляются эндометритами и маститами.

В патологии сельскохозяйственных животных наибольшее значение имеют следующие виды гноеродных стрептококков (род Streptococcus, семейство Streptococcaceae): а) S. agalactiae — возбудитель мастита коров; б) S. equi — возбудитель мыта лошадей; в) S. pneumoniaе — возбудитель стрептококковой (диплококковой) септицемии молодняка сельскохозяйственных животных: г) S. pyogenes — возбудитель гнойно-некротических процессов.

Мастит коров. Основной возбудитель — S. agalactiae. Но в этиологии мастита, кроме S. agalactiae, могут принимать участие до десятков других видов микроорганизмов, в том числе стрептококков, стафилококков, эшерихии, вульгарный протей. Мастит — это воспаление молочной железы коровы. Мастит у коровы возникает не только во время лактации. Это заболевание может развиться и во время сухостоя, когда животное отдыхает перед очередным отелом. Мастит у коров приводит к снижению продуктивности животных. Заболевание не только снижает количество молока у коровы, но также может сделать его непригодным для употребления. При сильном воспалительном процессе животное испытывает все последствия тяжелейшей интоксикации, кроме того, маститы негативно влияют на внутриутробное развитие плода и физиологическое состояние новорожденных телят. Лишенные молозива, телята не получают полноценную иммунную защиту. При болезнях вымени патогенные штаммы кишечной палочки и стафилококков легко передаются молодняку именно через молозиво, вызывая желудочно-кишечные и легочные заболевания и гибель приплода.

Мастит у коровы имеет несколько вариантов развития: полное выздоровление; переход в хроническую форму; скрытое воспаление; потеря четверти.

Формы мастита: субклинический и клинический.

Субклинический мастит — этот тип воспаления вымени нельзя заметить по внешним признакам. Для того чтобы провести диагностику этого мастита, необходимо провести лабораторное исследование — анализ на поражение калифорнийским мастит-тестом (CMT) и подсчет соматических клеток (SCC). Этот тип воспаления, в зависимости от возбудителя заболевания, может перейти в клинический или вылечиться самостоятельно.

Клинический мастит проявляется в легкой, умеренной, тяжелой и гангренозной форме. При легкой форме молоко выделяется хлопьями или комками и непригодно для употребления. Вымя при этом выглядит совершенно нормально. Чаще всего в такой форме заболевание во многих хозяйствах даже не диагностируется. При умеренной форме вымя отвердевает, краснеет, набухает и становится болезненным, температура воспаленной четверти повышается. Внешний вид молока также изменяется. Отек вызывается сгустками молока, которые блокируют молочные каналы. Как следствие, снижается продуктивность коровы. Для тяжелой формы мастита характерно следующее: молоко становится водянистым, похожим на сыворотку, может быть с примесью крови. Продуктивность коровы резко снижается. Инфекция способна вызывать снижение уровня кальция в крови, при этом у коров появляются симптомы молочной лихорадки (гипокальцемии). При таком мастите у животного все признаки сильной интоксикации. Гангренозную форму мастита можно диагностировать по охлаждению, голубоватому оттенку четверти. Мастит этого типа ведет к потере четверти вымени.

Причины мастита коров. Выделяют инфекционные факторы, приводящие к данному заболеванию, и неинфекционные. Среди болезнетворных микроорганизмов нередко встречаются патогенные стрептококки, стафилококки, а также микоплазмы, синегнойная и кишечная палочки, сальмонеллы и др. Чтобы микробы могли проникнуть в молочную железу коровы, бывает достаточно вытереть ее вымя грязным полотенцем или обмыть грязной водой. Также в случае инфицирования рук самой доярки у коровы может развиться мастит.

Если вымя было каким-либо образом травмировано, тогда также возникает мастит. Поэтому любые уколы, щипки, ссадины, удары, переохлаждение или обморожение могут стать причиной развития данного заболевания.

В сухостойный период воспаление вымени возникает под воздействием неблагоприятных факторов, снижающих общий иммунитет и резистентность организма и тканей вымени. Причиной могут служить антисанитарные условия содержания; сквозняки, неполноценное кормление, нарушение техники доения и порядка запуска. Неправильный запуск коров является причиной проникновения инфекции в ткани вымени и развития воспалительного процесса, который проявляется уже после отела.

Необходимо своевременно поставить диагноз «мастит».

Сухостойный период — оптимальный для проведения лечения коров от мастита, а также своевременной диагностики его скрытых форм. В этот период на мастит коров исследуют дважды: в самом начале, а затем за 10–15 дней до отела. Если корова здорова, в первые 20–30 дней сухостоя секрета много, он жидкий, серовато-белого цвета, без хлопьев, во второй половине сухостоя секрета мало (3–5 мл), он вязкий, тягучий, клейкий, желтовато-коричневого цвета. В любом случае, даже если видимых изменений в структуре вымени и качестве молочного секрета нет, необходимо сделать лабораторный анализ на скрытый мастит. Чаще всего мастит наблюдается в течение первых двух месяцев после запуска коровы и после отела.

Период запуска — самый ответственный. Необходимо следить за состоянием вымени. При любом покраснении проводится пробное доение четверти. В первый месяц запуска у здоровой коровы молоко жидкое, без изменения цвета. Если имеются хлопья, значит, животное заболело. Во второй месяц запуска вместо перегоревшего молока в вымени образуется секрет, по консистенции напоминающий мед. Его немного — 3–4 мл. Более жидкий секрет сероватого оттенка — признак мастита.

После отела необходимо проверить состояние молозива коровы (молозивный период длится 5–7 дней). Тест можно легко проделать в домашних условиях без помощи реактивов. Молозиво наливается в пробирку и ставится на час в холодильник. Если за это время жидкость расслоится — у коровы мастит и кормить теленка корова не должна.

Лечение мастита. Многое зависит от того, какая форма мастита развилась. При первых симптомах заболевания нужно сразу начать лечение мастита у коров. При развитии хронической формы удои значительно сокращаются, а само заболевание может дойти до гангрены вымени. Больное животное нужно отделить от стада и поселить в чистое и сухое стойло. Сочные корма давать не следует, а лучше свежее сено. Сдаивание проводят каждые 6–8 ч в отдельную посуду, выдоенное молоко потом дезинфицируют и выливают. Доить на пол или выливать непродезинфицированное молоко нельзя, так как болезнетворные микробы будут распространяться на вымя больного животного и на здоровых особей.

Обязательное лекарство при маститах любой формы — антибиотики. Они могут быть как широкого спектра действия, так и специфическими. Назначаются после определения чувствительности к ним микроорганизмов. Также применяют противовоспалительные препараты и делают на вымя различные аппликации, чтобы здоровье животного восстановилось быстрее. Во время лактации антибиотиками лечить коров нельзя, поскольку в этом случае молоко будет непригодно для использования. При остром воспалительном процессе можно назначить промывание молочных цистерн дезинфицирующими растворами или настойками трав.

Профилактика мастита. Начинать профилактику следует с улучшения гигиены содержания и кормления животных, а также постоянного обследования оборудования и коров. Заболевших животных следует изолировать от здоровых, а лечение проводить своевременно и в полной мере. Очень важно снизить возможность проникновения болезнетворных микроорганизмов в вымя. Для этого перед каждой дойкой соски необходимо обмывать теплой водой. После дойки на кончике соска остается молочная капля — она также может служить источником инфекции, так как молоко — прекрасная среда для размножения бактерий. Сосковое отверстие после доения остается открытым от 30 мин до 2 ч, и времени этого вполне достаточно, чтобы болезнетворные микробы проникли внутрь. После дойки соски животного также необходимо дезинфицировать, для этого подойдет 1%-ный раствор хлористого йода (1 мл на 100 мл воды) или 3–5%-ный раствор ЭМС-Й, вид А (1 ч. ложка на 100 мл воды). Соски необходимо погрузить в дезинфицирующий раствор на пару минут.

Важное значение имеет правильный запуск коров. За неделю до начала запуска количество сочных и концентрированных кормов необходимо снизить и коров перевести на однократное доение в течение 4–5 дней. Далее их доят через 1–2 дня и прекращают доить, когда суточный удой составит 0,5–1 кг молока. Сухостойный период составляет 60 дней, на протяжении всего этого времени обязательно следует проводить диагностику маститов.

1.2.2. Мыт лошадей

Мыт лошадей — острое инфекционное заболевание лошадей, преимущественно молодняка, характеризующееся гнойно-катаральным воспалением слизистой оболочки носоглотки и абсцессами подчелюстных лимфатических узлов.

Болеют молодые лошади, чаще от 6 мес. до 5 лет. Случаи заболевания животных старших возрастов наблюдаются редко. Источником возбудителя инфекции являются больные и переболевшие животные, а также здоровые бактерионосители. Заражение происходит чаще алиментарным и реже аэрогенным путем. Предрасполагающими факторами являются простуда, транспортировка, плохие условия содержания и др. Проявляется мыт спорадически или в виде эпизоотических вспышек. Обычно летальность не превышает 5%, однако при неблагоприятных факторах мыт может распространяться быстро, и в таких случаях летальность достигает 30–70%.

Инкубационный период длится 1–15 дней. Болезнь может протекать остро и подостро. Различают типичную и атипичную формы (метастатическая и абортивная), иногда встречается генитальная форма мыта.

Для типичной формы характерна высокая температура тела (40–41 °С), пониженный аппетит, угнетение, ринит, слизисто-гнойное истечение из носа, кашель, воспаление подчелюстных лимфатических узлов с последующим нагноением и вскрытием их. При пальпации области глотки выявляется сильная болезненность. Дыхание учащенное и сопящее. В процесс вовлекаются многие лимфатические сосуды.

При метастатическом мыте образуются абсцессы в легких и других внутренних органах и лимфоузлах, постоянно держится высокая температура, животное истощено.

Для абортивной формы характерны повышение температуры тела, ринит, незначительное увеличение подчелюстных лимфатических узлов без нагноения. Через 5–7 дней наступает выздоровление.

Генитальная форма мыта проявляется катарально-гнойным воспалением слизистой оболочки влагалища, регионарных лимфоузлов, иногда гнойным маститом. У жеребцов протекает в виде острого катарально-гнойного воспаления головки полового члена и мочеиспускательного канала.

Дифференциальный диагноз. Необходимо исключить сап, грипп лошадей. При сапе чаще наблюдают односторонние гнойные истечения из носа, обнаруживают специфические узелки и язвы на носовой перегородке. Подчелюстные лимфоузлы при сапе увеличены, плотные и не абсцедируют. Сап часто протекает при нормальной температуре тела и сохраненном аппетите.

Лечение. Больных животных немедленно изолируют в отдельное сухое, теплое помещение без сквозняков. Проводят вскрытие абсцессов и обработку раны. Применяют антибиотики (геомицин ретард, терравитин, линкомицин, кламоксил и другие внутримышечно в дозе 1 мл на 10 кг живой массы 1 раз в 3 дня); сульфаниламидные препараты (триметасул или триметазульф и др.). Внутривенно — 150–200 мл 33% спирта, приготовленного на 20–30% глюкозе с добавлением 1% норсульфазола (при метастатическом мыте).

Профилактика и меры борьбы. В целях профилактики мыта необходимо молодняк обеспечить полноценным кормлением; содержать в сухих, хорошо вентилируемых конюшнях; предоставлять ежедневный моцион; постоянно оберегать жеребят от воздействия простудных факторов (сквозняки, водопой из холодных водоисточников, пребывание под холодным дождем).

Для предотвращения возможного заноса возбудителя мыта завоз лошадей и приобретение фуража производят только из хозяйств, благополучных по данной болезни. Всех вновь поступивших лошадей содержат обособленно в профилактическом карантине 30 дней.

В случае возникновения мыта конеферму (табун) объявляют неблагополучной и накладывают ограничения. Запрещают выводить лошадей их неблагополучной фермы и вывозить фураж, перегруппировку лошадей внутри хозяйства, допуск посторонних лиц на ферму. Проводят поголовный клинический осмотр и термометрию лошадей. Больных животных изолируют и лечат, остальных ежедневно осматривают, организуют им индивидуальное содержание, кормление и водопой, проводят дезинфекцию помещений. Хозяйство объявляют благополучным и снимают ограничения через 15 дней после выздоровления последнего больного животного и проведения заключительных ветеринарно-санитарных мероприятий (поголовный клинический осмотр, заключительная дезинфекция).

1.2.3. Диплококковая септицемия молодняка

Диплококковая септицемия молодняка — инфекционная болезнь преимущественно молодняка сельскохозяйственных животных, которая проявляется признаками сепсиса.

Возбудитель — S. pneumoniae (пневмококки). Относится к семейству Streptococcaceae, роду Streptococcus, насчитывающему почти 40 видов. У новорожденных пупочную инфекцию и септическую форму преимущественно вызывает гемолитический S. zooepidermicus группы С; стрептококковую пневмонию телят и поросят — S. pneumoniae (син. Diplococcus lanceolatus); лимфадениты, артриты и абсцессы в тканях — серогруппы стрептококков С, D, Е и L. Патогенные стрептококки — неподвижные, в диаметре не менее 2 мкм, грамположительные, имеют капсулу, микроаэрофилы. Обладают факторами вирулентности (адгезины, гемолизины, гиалуронидаза, токсины). Принадлежат к слабоустойчивым во внешней среде микроорганизмам: особенно чувствительны к солнечным лучам и высушиванию. Однако возбудитель, высушенный в белковой среде (кровь, гной, мокрота), сохраняется до 2 мес., в молоке — в течение часа. Нагревание при 55 °С убивает его за 10 мин, 2%-ный раствор фенола — за 5 мин, 2%-ный раствор формальдегида и 20%-ная свежегашеная известь — за 10–15 мин. Возбудитель по устойчивости к дезсредствам относится ко 2-й группе (устойчив).

Пути заражения — алиментарный и аэрогенный. Заболевает молодняк с первых дней жизни.

Патогенез. Попав в организм, возбудитель размножается в месте внедрения, а затем разносится с током крови и лимфы. Токсины, выделяемые стрептококками, угнетают иммунную систему, вызывая иммунодефицит.

Клинические признаки и течение. Инкубационный период — 1–2 дня, иногда до недели. Болезнь протекает сверхостро, остро, подостро и хронически. Сверхострое течение (септикотоксическая форма): внезапная слабость, конъюнктивит, ринит, повышение температуры (40–42 °С), одышка, хрипы, аритмия, цианоз слизистых и перед смертью — истечение из ноздрей пенистой жидкости (отек легких). Животное погибает через несколько часов. Острое течение: гипертермия (41–42 °С), учащенный слабый пульс и дыхание, обильное слезотечение, катарально-гнойные истечения из ноздрей, отсутствие аппетита, аритмия, у новорожденных воспаляется пупочный канатик, нарастающая слабость, депрессия, гибель через 1–2 дня с признаками септицемии (септическая форма). Подострое течение: слабая лихорадка и плохой аппетит, часто остаются незамеченными. Вскоре появляются ведущие признаки поражения легких (легочная форма), суставов (суставная форма), пищеварительного тракта (кишечная форма). Возможна и смешанная форма с признаками катаральной бронхопневмонии, гастроэнтерита и воспаления суставов. Животные худеют, глаза глубоко западают в орбиты. Смерть при несвоевременном лечении — через 2–3 дня. Хроническое течение наблюдают у животных старшего возраста. Отмечается перемежающаяся лихорадка, периодическая диарея, пневмония, катарально-гнойный ринит, кашель становится частым, влажным, появляются хрипы.

Тяжесть болезни зависит от степени поражения легких.

Патолого-анатомические исследования. При сверхостром течении характерные патолого-анатомические процессы не успевают развиться. Находят лишь кровоизлияния в слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта, брюшине, в эпи- и эндокарде.

Клиника. При остром течении в зависимости от путей заражения поражаются преимущественно дыхательная или пищеварительная системы. При аэрогенном заражении: в верхних дыхательных путях — острое катаральное воспаление, в бронхиальных и средостенных лимфоузлах — серозное воспаление, в легких — серозно-геморрагическая или крупозная пневмония, в плевре и перикарде — фибринозное воспаление. Селезенка увеличена, септическая, резиноподобной консистенции, выявляются множественные кровоизлияния в эпи- и эндокарде, в плевре, зернистая дистрофия в печени, почках и миокарде.

При алиментарном заражении поражается желудочно-кишечный тракт. В сычуге и тонком кишечнике — острое катаральное или геморрагическое воспаление. Кроме того, обнаруживают морфологические признаки сепсиса. Могут одновременно поражаться дыхательная и пищеварительная системы. При хроническом течении болезни основные патолого-анатомические процессы локализуются в легких. В них фибринозно-некротическая пневмония, которая часто осложняется серозно-фибринозным плевритом и перикардитом, обнаруживают также инкапсулированные абсцессы в легочной ткани, в уставах — серозно-фибринозное или гнойное воспаление.

Патолого-анатомическая картина. При остром течении отмечается геморрагический диатез; септическая селезенка (резиноподобная, каучуковая консистенция); серозное воспаление бронхиальных и средостенных лимфоузлов; зернистая дистрофия печени, почек, миокарда; серозно-геморрагическая или крупозная пневмония (с преимущественным поражением передних и средних долей); серозно-фибринозный плеврит и перикардит.

Для хронического течения характерны: крупозная некротическая или фибринозно-гнойная абсцедирующая пневмония; серозно-фибринозный плеврит и перикардит; серозно-фибринозные или гнойные артриты.

При диагностике стрептококковой септицемии учитывают эпизоотическую ситуацию, возраст животного, клинические признаки, патолого-анатомические изменения, результаты бактериологического исследования. Дифференцировать нужно от колибактериоза, сальмонеллеза, пастереллеза, диспепсии. При колибактериозе выражен сепсис, но нет пневмонии; при сальмонеллезе находят сепсис и сальмонеллезные узелки в печени; при пастереллезе есть крупозная пневмония, но нет септической селезенки; при диспепсии нет сепсиса.

1.2.4. Диагностика стрептококкозов

Диагностика стрептококкозов. Материал для исследования: при подозрении на мастит коров исследуют паренхимное молоко; на мыт лошадей — прижизненно исследуют носовые истечения, содержимое абсцессов лимфатических узлов (пунктат), для посмертной диагностики — кровь из сердца, кусочки печени, легких, селезенки; на септические стрептококкозы — кровь из сердца, паренхиматозные органы, костный мозг.

Лабораторная диагностика стрептококкозов основана на результатах бактериоскопического исследования, выделения чистой бактериальной культуры, биохимических, серологических исследований и биопроб.

Морфология. Микроскопия препаратов из исходного материала. Препараты окрашивают по Граму и на капсулы. Все стрептококки грамположительные, сферические или овальные клетки, диаметром 0,5–1,5 мкм, расположенные в цепочку различной длины, спор не образуют, неподвижные. Особо вирулентные штаммы образуют капсулу.

Культуральные свойства. Стрептококки — факультативные анаэробы. На обычных питательных средах растут слабо. Для культивирования используют обогащенные среды: МПА с 1% глюкозы и 5% крови барана или кролика; МПБ с 1% глюкозы и 10% инактивированной сыворотки крови лошади. Оптимальная температура роста — 37–38 °С (от 25 до 45 °С). S. agalactiae: в глюкозо-кровяном бульоне среда остается прозрачной, формирующиеся крупинки оседают на дно; на глюкозо-кровяном агаре — колонии мелкие, сероватые, просвечивающиеся с бета- или двойной зоной альфа-гемолиза. S. equi: в МПБ рост с помутнением среды и образованием хлопьевидного осадка. Через 3–5 суток культивирования бульон просветляется, на дне пробирки осаждается плотный осадок. На МПА колонии мелкие, росинчатые, слизистые, округлой формы с зоной бета-гемолиза, позднее становятся серо-белыми. S. pneumoniaе: в МПБ растет с равномерным помутнением среды; на МПА колонии круглые, полупрозрачные, плоские, с приподнятым центром и краями, с зоной альфа-гемолиза. S. pyogenes: в МПБ растет с просветлением среды и выпадением зернистого осадка; на МПА колонии мелкие, прозрачные, округлой формы, с зоной бета-гемолиза (рис. 1.2.1, 1.2.2).

Рис. 1.2.1. Streptococcus pyogenes на кровяном агаре

Биохимические свойства

Streptococcus agalactiae: не разжижает желатину, не редуцирует и не свертывает метиленовое молоко; ферментирует углеводы: лактозу, сахарозу, глюкозу, мальтозу; не ферментирует сорбит и дульцит; вызывает гидролиз гиппурата натрия. Проявляют гемолиз в условиях САМР-пробы (на кровяной агар в чашках Петри бактериологической петлей по диаметру засевают в виде полоски гемолитический стафилококк. Отступив 2–3 см, перпендикулярно к стафилококку петлей высевают штаммы исследуемых стрептококков, помещают в термостат (37 °С на 24 ч).

Рис. 1.2.2. Разные виды патогенных стрептококков: 1 — чистая культура S. agalactiae; 2 — S. equi в гное; 3 — S. pyogenes в крови (сепсис); 4 — S. pneumoniaе в патологическом материале из легких; 5 — S. pyogenes в гное; 6 — образование поперечной перегородки в делящейся клетке гемолитического стрептококка: а — образующаяся перегородка; б — нуклеоид; в — клеточная стенка

Во всех случаях выделения агалактийного стрептококка в пробах молока высокое содержание лейкоцитов, ослабление лизоцимной активности, положительная проба Уайтсайда (лейкоцитоз), положительная бромтимоловая проба на щелочность молока.

Вирулентность патогенных стрептококков обусловлена тем, что они вырабатывают токсины. Так, S. agalactiae продуцирует гемолитический, некротический лейкоцидин, эритрогенный токсин (обуславливает местную воспалительную реакцию тканей), вырабатывает ферменты фибринолизин и гиалуронидазу, усиливающие его патогенность.

S. equi: не свертывает молоко, не редуцирует лакмус и метиленовый синий, не сбраживает лактозу, сорбит, манит, что позволяет дифференцировать его от других стрептококков; не растет в присутствии мытного антивируса (фильтрат 20-дневной бульонной культуры мытного стрептококка), в то время как все остальные виды стрептококков растут.

S. pneumoniaе: ферментирует углеводы лактозу, сахарозу, глюкозу, мальтозу, салицин, инулин; не разжижает желатину, не образует индол, свертывает молоко; растворяется в желчи. Отношение к желчи и разложение инулина имеет дифференцирующее значение от других стрептококков.

Серологическая типизация выделенного стрептококка определяется в реакции кольцепреципитации с использованием преципитирующих групповых стрептококковых сывороток и суточной бульонной культуры.

Биопроба. Биопробу на стрептококкозы проводят на белых мышах с применением свежевыделенных штаммов 18–20-часовых бульонных культур. Культуру вводят трем мышам внутрибрюшинно по 0,5 мл. При гибели не менее двух мышей культуру признают патогенной.

В случае инфекции, вызванной S. pneumoniaе, проводят выделение возбудителя из исследуемого материала методом биопробы (тканевую суспензию, разведенную в стерильном физиологическом растворе в соотношении 1:2, внутрибрюшинно вводят белым мышам).

В положительных случаях мыши погибают через 1–2 сутки.

Схемы лабораторной диагностики и биопрепараты. См. приложения.

1.3. Возбудители стрептококкоза свиней

Стрептококкоз свиней чаще является главной причиной потерь подсвинков и поросят-откормочников. У поросят наиболее часто стрептококки вызывают менингит, который вызывается S. suis типа 1 и особенно типа 2. S. suis типа 1 вызывает септицемию, менингит и артрит у поросят-сосунов. Свиноматка является переносчиком инфекции, которая проникает через миндалины в организм поросят и вызывает повышение температуры, а в отдельных случаях приводит к смерти. Другие поросята того же помета могут иметь менее тяжкие клинические симптомы. Артрит, приобретенный в возрасте 5–10 дней, может проявляться впоследствии у взрослых свиней и приводит к снижению их репродуктивности. Микроб легко выделяется из организма поросят, погибших в стадии септицемии, из мозга и суставов животных с признаками менингита и артрита. S. suis типа 2 является наиболее частым виновником стрептококкового менингита у свиней. Микроб может вызвать септицемию, но основные клинические симптомы — это менингит у свиней-отъемышей до 70 кг, хотя могут быть поражены и взрослые свиньи со слабым иммунитетом. У инфицированных свиней повышается температура, «стекленеют» глаза, могут быть судороги головы или конвульсии, они погибают в течение нескольких часов или выживают, если болезнь длится несколько дней. Поражение мозга у свиней может быть длительным.

В связи с имеющейся полисахаридной оболочкой у восприимчивых (не имеющих типичных антител) животных инфекция эта охраняется от фагоцитоза, кроме прочих, определяет его болезнетворность. В настоящее время известны 35 имеющих оболочку серотипов S. suis. Часть изолированных штаммов невозможно классифицировать ни в одной группе серотипов, и это связано с отсутствием оболочки. Идентифицировано два протеина, связанные с вирулентностью S. suis типа 2. Первый высвобождается мурамидазой (MRP), и другой, который ввиду проявления только в супернатанте, назвали внеклеточным фактором (EF). Считается, что эти белки являются факторами вирулентности, играющими существенную роль в патогенезе заражения этим микроорганизмом. Если болезнь протекает с клиническими признаками, характерными для стрептококкоза, изолируются, кроме того, серотипы от 1 до 8 S. suis. Стрептококки S. suis можно изолировать также и от здоровых свиней. Результаты молекулярных исследований показывают, что в области каждого серотипа S. suis имеется целый ряд генотипов этого микроорганизма. На ферме, которой коснулась энзоотическая форма стрептококкоза, болезнетворный генотип S. suis типа 2 может одновременно иметь болезнетворные и непатогенные штаммы S. suis. Во время эпизоотии стрептококкоза на свиноферме можно изолировать одновременно от поросят оба вида этих штаммов, что может осложнить производство вакцины. Свиньи являются главным источником и вектором в распространении S. suis. Есть много восприимчивых к заражению этими микроорганизмами пород домашних и используемых свиней, а также птиц и грызунов. Из миндалин, из половой системы и кишечника здоровых животных можно изолировать ряд стрептококков. Микроорганизмы эти считаются составляющими бактериальной флоры кишечника (S. intestinalis, S. hyointestinalis, S. suis, S. alactolyticus). От даже одной здоровой особи можно иногда изолировать много серотипов стрептококка. Исследуя свиней на наличие S. suis, в 31% случаев изолирован от свиней только один серотип S. suis, в 38% — 2 или 3 серотипа и в 6% — более чем 4 серотипа. Особое внимание ученых обращено на факт изоляции S. suis от все большего числа пород животных и птиц. Это явление с уверенностью может иметь существенное значение в распространении инфекции этим микроорганизмом.

Устойчивость. Streptococcus suis имеет большие способности выживания вне организма свиней — в воде при температуре 4 °С живет в течение почти двух недель, в кале при температуре 0 °С живет до 15 недель. При комнатной температуре сохраняет инфицирующие способности до двух недель. Стрептококки очень восприимчивы ко всем обеззараживающим средствам и к детергентам. Тридцатиминутное воздействие мыла приводит к их инактивации.

Патогенез. Источником стрептококков обычно являются клинически здоровые носители этих микроорганизмов. Введение в восприимчивое к заражению стадо распространителей патогенных штаммов S. suis вызывает резкое проявление стрептококкоза, прежде всего в группах отсаженных поросят и подсвинков. Заражение новорожденных может произойти уже в первые дни и даже часы их жизни. Это происходит аэрогенным путем, а также и в результате питья поросятами инфицированного молозива или молока. Возможно заражение через родополовые пути, где он часто бытует. Воротами проникновения стрептококков в организм из зараженной среды является также пораженный эпителий слизистой оболочки полости губы новорожденных как следствие неправильного срезания клыков, в результате чего появляется местное повреждение и некроз противоположной десны. Несмотря на то что большинство отсаженных поросят инфицированы S. suis, только некоторые из них заражены штаммами, способными вызвать болезнь. Вектором в распространении стрептококкоза могут быть блохи. В организме стрептококки живут до 5 дней.

Важную роль в патогенезе играют моноциты. Выполняют они только роль «переносчика» штаммов S. suis из миндалин в мозг, суставов и сывороточных оболочек организма, но являются также формой инкубатора, в котором микроорганизмы эти могут размножаться. Эти клетки могут переносить болезнетворные штаммы, зато они не способны перемещать невирулентные штаммы. Большинство научных работ, касающихся патогенеза стрептококкоза, относятся к стрептококковому воспалению оболочек мозга. Гораздо хуже изучен патогенез очень важной актуальной проблемы, которой является воспаление легких, связанное с инфицированием подсвинков или откормочников S. suis типа 2. Доказано, что на свинофермах, инфицированных вирусом PRRS и S. Suis, число случаев стрептококкового воспаления оболочек мозга намного больше, нежели в хозяйствах, инфицированных исключительно S. suis.

Независимо от клинической формы стрептококкоза первичным местом существования стрептококков являются миндалины. Отсюда микроорганизмы попадают в периферийные лимфатические узлы, в которых могут быть задержаны, что блокирует развитие болезни, или, в случае снижения их сопротивляемости, попадают в кровь, вызывая сепсис. С кровью могут попасть в оболочки мозга, суставов, легких, сердца и иные органы. Клинические проявления стрептококкоза зависят от места, куда проникли стрептококки, а также степени повреждения инфицированных органов.

Клинические признаки. В течение стрептококкоза можно наблюдать очень разные клинические симптомы, связанные с воспалением оболочек мозга, легких, суставов, слизистых оболочек, детородных путей, сердечной мышцы и с септицемией и околобронхиальным воспалением легких. Клинические симптомы болезни наблюдаются у свиней разного возраста, как у недельных поросят, так и у 70-килограммовых откормочников, и даже у свиноматок. При острой форме стрептококкоза ее течение может быть бессимптомным, а единственным симптомом проявления болезни в стаде являются внезапный падеж отсаженных подсвинков или откормочников. Температура тела повышается до 42,5 °С.

В практике вызывающими подозрение признаками являются поражения и конвульсии, связанные с воспалением оболочек мозга. При визуальном наблюдении стада можно заметить нарушение координации движений, в том числе «забрасывание зада», нарушение естественного поведения, отставание поросят от группы, потерю аппетита и связанное с этим похудение (рис. 1.3.1).

При суставной форме стрептококкоза спустя несколько дней обнаруживается наличие лежащих на боку поросят, выполняющих конечностями весельные движения; иногда из пасти выделяется пенистая слюна, а у некоторых поросят наблюдается нистагм. Последствием укрепления стрептококка в суставах являются воспалительные признаки, проявляющиеся в отеке и связанной с этим хромоте. У свиноматок S. suis бывает причиной выкидышей или воспалительных изменений во влагалище, что проявляется в виде слизистых выделений. S. suis может быть причиной сниженной даже до 15% результативности покрытия, рождения мертвых плодов и резкого падежа поросят в первые 24 ч жизни.

Streptococcus suis вызывает воспаление перикарда, его последствием является падеж откормочников с признаками цианоза. В Польше S. suis все чаще является причиной воспалительных изменений в легких, главным образом у свиней с массой тела 20–60 кг. Ввиду диагностических трудностей фактор болезни не всегда бывает обнаружен. Интересно, что в Великобритании стрептококкоз связывают прежде всего с сепсисом, воспалением оболочек мозга, воспалением суставов и редко с воспалением легких, в то время как в США и Голландии S. suis считают главным этиологическим фактором воспаления легких и только потом причиной воспаления оболочек мозга, воспаления эндокарда и суставов.

Патолого-анатомические изменения. К изменениям, характерным для стрептококкоза у свиней, относятся: увеличение бронхиальных лимфатических узлов, брыжейки и селезенки; гиперемия и заметно налитые кровеносные сосуды оболочек мозга; увеличенное количество мозговой жидкости. Типичным является фибринозно-гнойное воспаление перикарда, который иногда полностью покрыт фибрином. В сумке перикарда и в грудной клетке обнаруживается большое количество сывороточной выпотной жидкости. В легких отмечается долечное воспаление легких и часто фибринозное воспаление плевры. Характерной чертой также является наличие транссудата и отложение фибрина между петлями кишечника. Могут произойти воспалительные изменения суставов конечностей.

Рис. 1.3.1. Стрептококковый менингит (S. suis типа 2): а — типичное положение головы при стрептококковом менингите поросят; б — поросята-сосуны с нарушениями деятельности головного мозга вследствие гнойного менингита, вызванного стрептококковой инфекцией; в — живой инфицированный подсвинок, отчетливо виден опистотонус и плавательные движения передних конечностей; такие движения зачастую ведут к повреждению кожи и костей; г — головной мозг с гнойным налетом на мозговых оболочках, вызванным стрептококковой инфекцией

Меры профилактики. В инфицированных S. suis типа 2 стадах риск всплеска болезни увеличивается вместе с частым воздействием стрессовых факторов; неправильным обрезанием клыков; шероховатой поверхностью полов, на которой находятся поросята; слабой молочностью свиноматки и связанной с этим борьбой поросят-сосунов за «хорошее место» при молочной железе; скученным содержанием в станках; частыми перемещениями и смешиванием разных групп свиней; появлением в стаде вируса РРСС; несоблюдением зоогигиенических требований (плохой системой вентиляции и освещенности, высокой влажностью и запыленностью и др.); необоснованной и резкой сменой корма; нехваткой витаминов Е и селена.

Общая схема лабораторной диагностики и биопрепараты. См. приложения.

Глава 2. ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ БАКТЕРИИ, НЕ ОБРАЗУЮЩИЕ СПОР

2.1. Возбудители туберкулеза

Туберкулез — хроническое инфекционное заболевание сельскохозяйственных и диких животных, птиц, а также человека, характеризующееся образованием в пораженных тканях и органах специфических бугорков (туберкулов), предрасположенных к творожистому распаду. Наиболее восприимчивы к туберкулезу крупный рогатый скот, свиньи и куры.

В последние годы в России отмечен рост туберкулезе среди населения.

В настоящее время Россия входит в первую десятку наиболее неблагополучных стран.

Возбудитель выделен в 1882 г. Р. Кохом.

Возбудители туберкулеза относятся к роду Mycobacterium, семейству Mycobacteriaceae. Различают следующие основные виды возбудителя туберкулеза: М. tuberculosis — возбудитель туберкулеза человека; М. bovis — возбудитель туберкулеза крупного рогатого скота; М. avium — возбудитель туберкулеза птиц; M. murium — вид возбудителя туберкулеза мышей-полевок; М. poykilothermorum — вид возбудителя туберкулеза холоднокровных. В патологии животных и человека участвуют первые три вида возбудителей туберкулеза.

Атипичные микобактерии. Наряду с истинными возбудителями туберкулеза в природе встречаются атипичные, что обуславливает их попадание в организм животных. Различают четыре группы атипичных микобактерий (по Е. Раньон, 1959):

1. Фотохромогенные, приобретающие на свету темно-оранжевую окраску. В темноте не образуют пигмент (М. kansassii).

2. Фотохромогенные, приобретающие ярко-оранжевую окраску независимо от выращивания на свету или в темноте (М. scrofulaceum, M. Gordonae, M. Aquae и др.).

3. Нефотохромогенные — могут быть неокрашенными или иметь желтовато-оранжевые оттенки. Пигментация не зависит от экспозиции на свету (М. intracellulare, M. Battey).

4. Быстрорастущие — образуют колонии в течение недели при 25 и 37 °С (M. phlei, M. smegmatis, M. fortultum).

Морфология. Виды микобактерий туберкулеза отличаются по морфологическим и культуральным свойствам. M. tuberculosis — тонкая, нежная, слегка изогнутая палочка; M. bovis — толще и короче, чем M. tuberculosis; M. avium — короче по сравнению с M. tuberculosis и M. bovis и более полиморфна. В электронном микроскопе микобактерии всех видов имеют вид палочки с закругленными концами.

Размеры и формы микобактерий могут иногда варьировать в зависимости от питательной среды, условий культивирования, возраста культуры.

В последние годы часто выделяют атипичные L-формы возбудителя туберкулеза. Это измененные формы, которые выделяют в виде мелких зерен, шаровидных тел. L-формы обладают способностью к реверсии (т. е. переходить в типичные, патогенные формы, вызывающие заболевания).

Микобактерии туберкулеза спор и капсул не образуют, неподвижны, аэробы. Высокая устойчивость микобактерий во внешней среде обусловлена тем, что они относятся к группе кислото-спирто-щелочеустойчивых, которые содержат в своем составе жировосковые вещества и миколовую кислоту (до 60%). В цитоплазме располагаются кислотолабильные гранулы, состоящие в основном из метафосфата (зерна Муха). Липиды и воскоподобные вещества придают микробной клетке гидрофобность, т. е. способность отталкивать воду и водные растворы красителей, кислот, щелочей, в связи с чем бактерии туберкулеза плохо воспринимают окраску.

Диагностика

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики: истечения из носа, бронхиальная слизь, молоко, сперма, фекалии, моча.

Для посмертной диагностики: труп птиц целиком (исследуют печень, селезенку, легкие, яичники). От крупных животных — кусочки пораженных тканей и органов с туберкулами, лимфатические узлы. Материал свежий, замороженный, или в 30%-ном глицерине.

Обсемененность патологического материала микобактериями туберкулеза может быть незначительной, поэтому для получения достоверных диагностических результатов специальными методами обработки повышают концентрацию возбудителя. К обработке предъявляют ряд требований: она должна обеспечивать гомогенизацию материала, уничтожать сопутствующую микрофлору, быть щадящей для микобактерий туберкулеза и способствовать их концентрации в материале (обогащение). Обогащение проводят в зависимости от исследуемого материала.

• Мокрота, слизь, гной — заливают равным объемом трехзамещенного фосфата натрия (на 24 ч в термостат). Центрифугируют при 3000 об/мин 10–15 мин. Исследуют осадок.

• Пораженные ткани — готовят гомогенат, заливают 3–10%-ным раствором H₂SO₄ (1:4). Центрифугируют при 3000 об/мин 10–15 мин. Отмывают физиологическим раствором. Исследуют осадок.

• Молоко — 150 мл. Центрифугируют при 3000 об/мин 20–30 мин. Осадок обрабатывают 3–6%-ным раствором H₂SO₄ 20–30 мин. Центрифугируют, исследуют осадок.

• Масло (2–4 г) — в стерильную пробирку. Залить горячей водой, встряхивать 5–10 мин. Перевернуть, охладить. Исследовать жидкость, как молоко.

• Фекалии (50 г) — растирают в 18%-ном растворе Н₂SО₄, фильтруют через марлю, центрифугируют. Исследуют осадок.

Для концентрации микобактерий в исследуемом материале применяют также метод флотации. В колбу с узким горлом вносят 10 мл гомогената + 10 мл 1%-ного NaOH, шуттилируют 10 мин. Затем + дистиллированную воду (1:9) + 1–2 мл ксилола (бензина, петролейного эфира), шуттилируют 10 минут + еще дистиллированную воду до горлышка. Через 30 мин исследуют содержимое флотационного кольца.

Лабораторная диагностика туберкулеза основана на результатах бактериологического, аллергического и серологического исследований.

Бактериологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале (методами световой и люминесцентной микроскопии и биопробы), выделение чистой культуры и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и патогенным признакам.

Бактериоскопия препаратов из исходного материала. Из-за специфического состава (30,0–40,0% липиды) микобактерии туберкулеза не окрашиваются обычными методами, но хорошо воспринимают краску после обработки карболовым фуксином при подогревании. Их красят специальным методом — по Цилю — Нильсену: добавляют карболовый фуксин (при подогревании), промывают водой, затем обесцвечивают мазок 5%-ным раствором серной кислоты (2 минуты) и снова промывают водой, проводят дополнительно обесцвечивание 70–90%-ным этиловым спиртом (3–5 с), докрашивают раствором метиленовой сини (или малахитовой зелени)

Микроскопическая картина: микобактерии окрашиваются в ярко-красный цвет, остальная микрофлора — в синий или в зеленый (рис. 2.1.1).

При окрашивании по Граму применяют модифицированный метод Грама — Мухи: на фиксированный мазок вносят карболовый метилвиолет (красят при подогревании), затем на 1 мин вносят раствор Люголя и обесцвечивают 5%-ной азотной кислотой (либо 3%-ной соляной кислотой, либо смесью ацетона и спирта), затем докрашивают сафранином или разведенный фуксином.

Рис. 2.1.1. Микобактерии туберкулеза. Окраска по Цилю — Нильсену

Микроскопическая картина: микобактерии фиолетового цвета, остальные микроорганизмы — красного цвета.

Бактериоскопический метод позволяет выявить возбудителя при концентрации микобактерий (1–5) × 10⁵/мл. Более результативна люминесцентная микроскопия (окраска аурамин-родамином), благодаря которой выявляют даже незначительное количество микобактерий, которые окрашены в бело-желтый цвет, а также формы с измененными тинкториальными свойствами.

Культуральные свойства. Возбудитель туберкулеза — строгий аэроб. Оптимальная температура для M. tuberculosis — 37–38 °C, M. bovis — 38–39 °C, M. avium — 39–41 °С. Оптимум рН среды — 6,8–7,4.

Растут медленно. Для культивирования микобактерий туберкулеза используют сложные питательные среды, содержащие глицерин, картофель, яйца, витамины. Рост бактерий стимулируют аспарагиновая кислота, альбумин, глюкоза, биотин, никотиновая кислота, соли аммония и др. Наиболее часто применяют среды Петраньяни, Левенштейна — Йенсена, Гельберга.

M. tuberculosis — на жидких средах к концу месяца образуется толстая морщинистая пленка (рис. 2.1.2). На плотных питательных средах — рост в виде сухого морщинистого налета кремового цвета. У колоний приподнятый центр, они крошковидные, с приятным запахом, по виду напоминают цветную капусту, плохо смачиваются водой.

На жидких средах при внутриклеточном развитии для M. tuberculosis характерно образование корд-фактора (трегалоза 6,6-дипилокат), способствующего сближению бактериальных клеток в микроколониях в виде серпантинообразных «кос» (рис. 2.1.3).

M. bovis — на жидких средах через 20–60 дней образуется пленка: вначале в виде единичных островков, которые затем сливаются в сплошную петлистую, бородавчатую пленку. На плотных средах — колонии мелкие, гладкие, цвета слоновой кости, иногда с морщинистым сероватым налетом.

M. avium — на жидких средах через 10–20 дней сначала образуется тонкая, нежная пленка, которая затем становится слегка морщинистой, влажной, жирной, образуется небольшой рыхлый осадок. На плотных яичных средах — колонии округлые, слизистые, мягкие, серовато-белые, маслянистые, с возрастом желтеют, иногда образуют возвышение с кратерообразным углублением.

Рис. 2.1.2. Рост M. tuberculosis на плотной и жидкой питательной среде

M. tuberculosis — патогенны для человека, крупного рогатого скота, свиней, собак, кошек. Из лабораторных животных восприимчивы кролики, морские свинки.

M. bovis — патогенны для крупного рогатого скота, овец, коз, свиней, лошадей, кошек, собак, оленей, маралов и др. Из лабораторных животных восприимчивы кролики, морские свинки. Восприимчив человек.

Рис. 2.1.3. Серпантинообразные «косы» из микобактерий туберкулеза (корд-фактор)

M. avium — вызывает туберкулез кур, индеек, цесарок, фазанов, павлинов, голубей, уток и других птиц. Также к нему восприимчивы свиньи, лошади, козы, овцы и иногда крупный рогатый скот и человек. Из лабораторных животных чувствительны кролики. Для биопробы от птиц используют кур.

Биопроба. Метод применяют не только для обнаружения возбудителя в исследуемом материале (рис. 2.1.4), но и для определения его видовой принадлежности.

Заражают: двух морских свинок — по 1–2 мл суспензии материала подкожно в область паха; двух кроликов — внутривенно; двух кур внутривенно (морских свинок и кур — после туберкулинизации!). Наблюдают 3 мес. При положительном результате у морских свинок через 2–3 недели увеличиваются регионарные лимфоузлы, на месте инъекции образуется уплотнение, затем язва. Через 30 дней морскую свинку туберкулинизируют. При положительной реакции подвергают убою и бактериологическому исследованию. При обнаружении в мазках микобактерий дают положительное заключение и дальнейшее биологическое исследование прекращают.

Рис. 2.1.4. Биопроба на туберкулез

Вид микобактерий устанавливают по результатам биопробы (табл. 2.1.1).

Таблица 2.1.1

Патогенность микобактерий туберкулеза для лабораторных животных

Серологическая диагностика. Постановку РСК (реакции связывания комплемента) рекомендуют как дополнительный метод при отборе для диагностического убоя животных, положительно реагирующих на туберкулин.

Аллергическая диагностика. Не принадлежит к лабораторным методам, но на практике является основным методом прижизненного определения инфекции у животных, в том числе у птиц (рис. 2.1.5).

Рис. 2.1.5. Положительная внутрикожная реакция на туберкулин: а — крупный рогатый скот; б — свиньи; в — куры

Применяют сухой очищенный туберкулин ППД (протеин пурифиед дериват), который вводят крупному рогатому скоту — буйволам, верблюдам, оленям — в толщу кожи в области средней трети шеи, свиньям — на наружную поверхность уха, курам — в толщу кожи бородки.

У крупного рогатого скота, буйволов, верблюдов, оленей реакцию учитывают через 72 ч, измеряя толщину кожной складки с учетом припухлости. Положительной реакцией считают тестоватый отек кожи размерами 35 × 45 мм и более. Кожная складка увеличивается на 3 мм и более. Для измерения кожной складки используют кутиметр.

У свиней учет реакции через 48 ч — большая болезненная припухлость на месте инъекции туберкулина. У кур реакцию учитывают через 30–36 ч — при положительной реакции бородка опухает, становится горячей.

Крупным животным проводится внутриглазная туберкулиновая проба. Туберкулин (3–4 капли) вводится в область внутреннего угла глаза. Учет реакции через 6–12 ч. Положительная реакция — гнойный кератоконъюнктивит (рис. 2.1.6).

Аллергическая диагностика позволяет поставить диагноз в начальной стадии развития болезни. При положительной повторной аллергической реакции животных сдают на специфический убой на мясокомбинат.

Рис. 2.1.6. Положительная внутриглазная проба на туберкулин: а — крупный рогатый скот; б — коза; в — верблюд

Симультанная аллергическая проба на туберкулез. Симультанная аллергическая проба с применением туберкулина и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ). Применяют для диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота при первичной постановке диагноза, а также для контроля за благополучием животных по туберкулезу в хозяйствах, где реакции на туберкулин обусловлены сенсибилизацией атипичными микобактериями. Проба является групповой и дает возможность ориентироваться в ситуации по туберкулезу лишь в целом по стаду или группе (не менее 6 голов) исследуемых животных.

Проба заключается в одновременном (симультанном) введении животным двух аллергенов: ППД-туберкулина для млекопитающих в стандартном растворе и комплексного аллергена из атипичных микобактерий (КАМ) и определении достоверности различия в интенсивности 12 (степени проявления) реакций на эти аллергены.

Под достоверностью различия понимают такое различие в величине показателей интенсивности реакций на туберкулин и КАМ, которое дает возможность с уверенностью не менее чем на 95% сделать заключение о состоянии по туберкулезу исследуемой группы животных.

Ее можно проводить не ранее, чем через 30 дней после последней туберкулинизации животных.

Туберкулин и КАМ вводят, соответственно, с левой и правой стороны тела животных строго симметрично в дозе по 0,2 мл: крс (кроме быков) — внутрикожно в середине шеи, быкам — также внутрикожно в левую и правую подхвостовую складки.

Учет и оценку реакций на туберкулин и КАМ проводят у крупного рогатого скота через 72 ч после инъекции аллергенов.

Реакцией считают припухлость в месте введения препарата, ощутимую при пальпации, независимо от ее характера (консистенции, температуры, болезненности и т. п.). При учете реакции у каждого исследуемого животного пальпируют место введения туберкулина. В случае обнаружения припухлости в месте его инъекции у этого животного прощупывают место введения КАМа и проводят измерение утолщения кожной складки. Более выраженную реакцию на туберкулин при менее выраженной или отсутствующей на КАМ обозначают знаком «+» (плюс), менее выраженную реакцию на туберкулин — знаком «–» (минус), при одинаковых реакциях — знаком «=» (равенство). Животных, не реагирующих на туберкулин, не учитывают, независимо от наличия или отсутствия у них реакций на КАМ.

Результаты оценки реакции на туберкулин в сравнении с реакцией на КАМ в знаках («+», «–», «=») записывают в ведомость учета симультанной пробы (табл. 2.1.2) и с помощью табл. 2.1.3 определяют достоверность различия в интенсивности реакций у животных на туберкулин и КАМ в целом по группе.

По ведомости подсчитывают общее количество животных, реагирующих на туберкулин с оценкой реакций «+ –» и «–» (животных, реагирующих на аллергены в равной степени, в расчет не берут), и таким образом определяют показатель А в табл. 2.1.3 (например, 14). Затем подсчитывают отдельно количество знаков «+» и знаков «–» и по табл. 2.1.3 сравнивают поочередно результаты с показателем Б, соответствующим установленному показателю А (в примере соответствующий показатель Б равен 12). Если количество знаков «+» равно или больше показателя Б, а также если при проведении пробы вообще не выявлено животных, реагирующих на КАМ, то это означает, что реакции на туберкулин выражены достоверно интенсивнее, чем на КАМ, и указывает на заражение животных возбудителем туберкулеза.

Если количество знаков «–» равно или больше показателя Б, значит, у животных реакции достоверно более выражены на КАМ. Если при этом у всех реагирующих на туберкулин животных реакции интенсивнее выражены на КАМ и получены отрицательные результаты бактериологических исследований, группу скота считают благополучной по туберкулезу. Также благополучным по туберкулезу считают поголовье животных, среди которых при проведении симультанной пробы не выявлено реагирующих на туберкулин.

Могут быть случаи, когда при достоверно более интенсивной реакции на КАМ в целом по стаду (группе) у отдельных животных наблюдаются реакции на туберкулин при менее выраженной или совсем отсутствующей реакции на КАМ. Это может быть обусловлено парадоксальным проявлением реакций на аллергены или наличием туберкулезной инфекции на фоне сенсибилизации животных к туберкулину атипичными микобактериями. Для уточнения диагноза всех таких животных, а также реагирующих в равной степени на туберкулин и КАМ (при утолщении кожной складки на 3 мм и более) обязательно подвергают убою с патолого-анатомическим исследованием на туберкулез. При отсутствии характерных изменении проводят бактериологическое исследование и в случае получения отрицательного результата стадо (группу) животных считают благополучным но туберкулезу.

Под достоверностью понимают степень различия и проявления реакций на туберкулин и КАМ, которая дает возможность с уверенностью не менее 95% сделать заключение о состоянии по туберкулезу исследуемой группы животных.

Достоверно большая интенсивность реакции на туберкулин указывает на заражение животных туберкулезом соответствующего им вида (млекопитающих — возбудителем туберкулеза бычьего или человеческого, птиц — птичьего вида); при достоверно более выраженной реакции на КАМ реакции на туберкулин считают обусловленными другими причинами.

При отсутствии достоверности различия в интенсивности реакций на туберкулин и КАМ результаты симультанной пробы считают неопределенными. В этом случае часть животных, реагирующих в большей степени на туберкулин, подвергают убою и исследованию на туберкулез. Окончательное заключение о состоянии стада или группы животных по туберкулезу делают по результатам патолого-анатомического или лабораторного исследований.

В некоторых хозяйствах возможно инфицирование животных туберкулезными и нетуберкулезными микобактериями. В этом случае при достоверно более интенсивной реакции на КАМ в целом по стаду (группе) у отдельных животных могут наблюдаться реакции на туберкулин при менее выраженных или совсем отсутствующих реакциях на КАМ. Для уточнения диагноза такие животные подлежат убою и исследованию на туберкулез.

Окончательное заключение о состоянии стада или группы животных по туберкулезу делают по результатам патолого-анатомического или лабораторного исследований.

Таблица 2.1.2

Ведомость учета симультанной пробы

Примеры пользования ведомостью учета симультанной пробы и таблицей определения различия реакций на туберкулин и КАМ у животных.

Таблица 2.1.3

Определение различия реакций на туберкулин и КАМ у животных

В ведомости, в верхней ее, части представлен пример учета результатов исследования животных, у которых оценка реакции проводится по утолщению кожной складки в миллиметрах (крупный рогатый скот, кроме быков и волов), в нижней части — по степени припухлости «+» в месте введения аллергенов (быки, волы, овцы, козы, куры). В правой графе указывается результат сравнительной оценки интенсивности реакций на туберкулин и КАМ у исследуемых животных, обозначенный знаками «+», «–» или «=», выражающими, соответственно, большую, меньшую или равную степень реакции на туберкулин по сравнению с реакцией на КАМ. Количество плюсов и минусов используют при определении достоверности различия в интенсивности реакций по таблице.

Как было указано выше, при определении достоверности различия в интенсивности реакций на аллергены животных, не реагирующих на туберкулин, не учитывают. Не подлежат также учету животные с равными реакциями на оба аллергена. Таким образом, в примере, приведенном в верхней части ведомости, имеются лишь 17 животных с отличающимися реакциями («+» или «–»). Из этого числа подсчитывают большее количество животных с одинаковым результатом сравнения реакций («+» или «–»). В данном случае больше животных (14), реагирующих на туберкулин интенсивнее (обозначены знаком «+»), чем на КАМ. Согласно таблице (приложение 2), различие в интенсивности реакций при учете ее у 17 животных (первая графа таблицы) достоверно при условии, если не менее 13 из них (вторая графа таблицы) имеют одинаковый результат сравнения реакций («+» или «–»). В примере таких животных 14. Следовательно, можно сделать вывод, что реакции на туберкулин с достоверностью не менее 95% более интенсивны, чем на КАМ, это свидетельствует о заражении животных возбудителем туберкулеза бычьего или человеческого типа.

В примере, приведенном в нижней части ведомости, видно, что различие в интенсивности реакций на аллергены недостоверно (из 14 учитываемых животных реакции менее выражены на туберкулин только у 9). В этом случае с животными следует поступить, как указано в наставлении («При отсутствии достоверности различия в интенсивности реакций на туберкулин и КАМ…»).

Молекулярно-биологическая диагностика туберкулеза. Одним из высокочувствительных и специфичных методов диагностики туберкулеза является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Этот метод высокочувствительный и специфичный на туберкулез. Сущность метода подробно описана нами в учебниках, включающих разделы по общей микробиологии и иммунологии. Чувствительность метода ПЦР — от 10 до 100 микроорганизмов в пробе (чувствительность микроскопического метода — от 103 до 105 микроорганизмов). В основе метода лежит амплификация специфических участков ДНК возбудителя, которые содержатся в исследуемой пробе. В настоящее время в лабораторной практике применяются тест-системы как для выявления ДНК конкретного вида, так и для дифференцирования видов, входящих в Mycobacterium tuberculosis complex: микобактерий человеческого вида (M. tuberculosis), бычьего вида (M. bovis) и вакцинного штамма микобактерий бычьего вида (M. bovis BCG). Для проведения анализа используют следующие образцы биопроб от крупного рогатого скота: цельную кровь, молоко, фарингеальные смывы, мочу, фекалии, носовую слизь и биопсийные материалы, в том числе лимфатические узлы. Молекулярно-биологическое исследование позволяет значительно ускорить раннюю диагностику туберкулеза, дифференцировать пара- и псевдоаллергические реакции на туберкулин, снизить количество подозреваемых в заражении туберкулезом и подвергаемых диагностическому убою животных. Окончательный диагноз на туберкулез устанавливается на основании комплексного исследования (рис. 2.1.7)

Рис. 2.1.7. Схема комплексной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота

Патогенез. Заражение происходит аэрогенным (воздушно-капельным и воздушно-пылевым), алиментарным (через рот) путем, через кожу и слизистые оболочки. Доказано внутриутробное инфицирование плода.

При развитии туберкулезного процесса в местах размножения возбудителя образуется защитный очаг — туберкул. Основу туберкула составляют фагоциты, формирующие узелок, который окружается соединительнотканной капсулой. Ткань внутри узелка из-за отсутствия притока питательных веществ и под действием токсинов возбудителя отмирает и превращается в творожистую массу.

Исход первичного туберкулезного процесса может быть различным. Инкапсулированные первичные очаги часто обызвествляются и вместе с туберкулезными палочками сохраняются в организме длительное время. При пониженной резистентности организма процесс инкапсуляции в первичном очаге выражен слабо, регенерация соединительной ткани недостаточна, это приводит к расплавлению стенок туберкулезного узелка. Микобактерии попадают в здоровую ткань, что приводит к образованию множества мелких узелков, которые, сливаясь между собой, образуют крупные туберкулезные фокусы. Отсюда микобактерии могут попасть в кровь и способствовать развитию туберкулезных очагов в разных органах (рис. 2.1.8).

Рис. 2.1.8. Туберкулы в пораженных органах: а — надвыменный лимфатический узел коровы; б — печень; в — трубчатая кость; г — легкие; д — лимфатические узлы; е — кишечник

Схема лабораторной диагностики и биопрепараты. См. приложения.

2.2. Возбудитель паратуберкулезного энтерита (паратуберкулеза)

Паратуберкулез — это хроническое инфекционное заболевание, характеризующееся профузным поносом, истощением, поражением кишечника с образованием отечно-воспалительных складок слизистого и подслизистого слоя (напоминающих мозг), увеличением мезентериальных лимфатических узлов.

Болеет преимущественно крупный рогатый скот, реже верблюды и овцы и еще реже козы и олени.

Возбудитель — Micobacterium paratuberculosis (Ионе, Фротингель, 1895). В Россию паратуберкулез был занесен с импортным племенным скотом и описан К. Г. Болем (1927).

Морфология. Возбудитель — короткая палочка, от 0,5 до 1,5 мкм. Спор и капсул не образует, неподвижная, кисло-устойчивая, грамположительная. Полиморфная (иногда напоминает гранату, бутылочку), располагается в виде бесструктурных глыбок, красится специальным методом по Цилю — Нильсену (рис. 2.2.1). В патологическом материале (пораженные части слизистой кишечника, слизь) бактерии располагаются в виде скоплений, редко одиночно, или группами по 2–4 клетки. В окрашенных препаратах скопления обнаруживаются и просматриваются даже при малом увеличении.

Культуральные свойства. Выделение чистой культуры очень затруднительно (большая загрязненность посторонней микрофлорой). Материал предварительно подвергают специальной обработке 5%-ным раствором Н₂SО₄ или применяют специальные сложные методы обработки с использованием фильтрации, центрифугирования, флотации.

Посев осуществляется на специальные питательные среды с добавлением вытяжки из убитых бактерий туберкулеза или кислотоустойчивых сапрофитов (бактерия тимофеевой травы Bact. phlei). Это очень сложные среды. Например: Среда Дюбо — Смита: К₂НРО₄ — 1,0; Na₂HPO₄ — 6,25; MgSO₄ — 0,01; CaCl₂ — 0,0005; ZnSO₄ — 0,0001; CuSO₄ — 0,0001; лимонно-кислое аммонийное железо — 0,05; аспарагиновая кислота — 1,0; гидролизат казеина — 80,0 мл; спиртовый экстракт Bact. phlei — 20,0 мл; сыворотка крови крупного рогатого скота — 20,0%; пенициллин — 50 ЕД/мл; агар-агар — 15,0; дистиллированная вода — 1000 мл.

Среда Данкина: Bact. phlei, выращенные в 4%-ном глицериновом бульоне; глицерин — 10,0; печеночный экстракт — 10,0; свежие куриные яйца — 3 шт.; спиртовый экстракт генцианвиолета.

Особое значение приобрела среда Вишневского, содержащая аспарагин, щавелевокислый аммоний, сернокислый магний, сернокислое железо, глицерин. Для культивирования благоприятна температура 38 °С. Первые признаки роста с момента посева появляются через 6 недель, иногда через 7 мес.

На жидких средах (Данкина, Вишневского, Дорсета, Бокэ, Генлея) образуют нежную беловатую пленку, которая через 3–4 мес. культивирования в силу своей тяжести опускается на дно пробирки.

Рис. 2.2.1. Паратуберкулезный энтерит: а — возбудитель Мicobacterium paratuberculosis, окраска по Цилю — Нильсену; б — колонии возбудителя; в — кишечник больного крупного рогатого скота; г — паратуберкулез у коровы

На плотных средах (яичные среды Петраньяни, Гельберга, Левенштейна, агаризированная среда Сотона) вначале вырастают изолированные сухие серовато-желто-белые мелкие колонии, которые затем приобретают вид сосочков, и появляется бугристость (рис. 2.2.1 б)

Антигенная структура. Изучена недостаточно. Установлено антигенное родство с M. avium.

Устойчивость. В почве и навозе сохраняет до 12 мес., в кормах и воде непроточных водоемов — до 8–10 мес., в моче — до 7 суток. Солнечный свет убивает его через 10 мес. В молоке, в закрытых сосудах, при нагревании до 63 °С погибает через 30 мин, при 65 °С — через 25 мин, при 85 °С — через 1–5 мин.

Чувствителен к 10–20%-ным растворам хлорной извести, 5%-ным растворам формалина, лизола, фенолятов натрия, феносмолина. Слабочувствителен к антибиотикам, сульфаниламидным препаратам, противомикробным, противотуберкулезным препаратам.

Патогенность. К микобактерии паратуберкулеза чувствительны и болеют крупный рогатый скот (особенно молодняк), буйволы, верблюды, овцы, козы. Не болеют лошади, мулы, свиньи. В качестве лабораторных животных служат кролики, мыши, хомяки. Морские свинки, куры используются для сенсибилизации при изучении аллергии.

В лабораторию посылают.

При жизни: фекалии с комочками слизи или крови, соскобы со слизистой оболочки прямой кишки.

Для посмертной диагностики: пораженный участок кишечника вместе с содержимым, перевязанный с двух сторон лигатурой, и брыжеечные лимфоузлы в 30%-ном растворе глицерина. Для гистологического исследования посылают материалы в 10%-ном растворе формалина.

Диагностика:

1) бактериоскопия;

2) посев на питательные среды;

3) биопробу не ставят (лабораторные животные не восприимчивы!);

4) РСК с сывороткой крови (с паратуберкулезным антигеном — метаноловый экстракт M. paratuberculosis); подтверждает клинические формы паратуберкулеза у 85% исследуемых животных (когда аллергическим методом невозможно подтвердить диагноз); недостаток РСК — отрицательный результат в доклинический период;

5) аллергическая диагностика (в область средней трети шеи — двойная внутрикожная проба туберкулином для птиц или паратуберкулином).

Специфическая профилактика — не разработана.

2.3. Возбудитель эризипелоидоза (рожи свиней)

Рожа свиней — инфекционное зооантропонозное септическое заболевание, характеризующееся кровоизлияниями на серозных и слизистых оболочках, крапивницей, геморрагическим гастроэнтеритом, нефритом, увеличением селезенки. При несвоевременных диагностике и принятии мер животные часто погибают. Возможен переход в хроническую форму.

Возбудитель — Erysipelothrix rhusiopathiae, род Erysipelothrix. Открыт в 1882 г. Л. Пастером и Л. Тюилье.

Морфология и тинкториальные свойства. В лабораторию направляют труп животного целиком или паренхиматозные органы (печень, селезенку, почку, сердце), трубчатую кость, при хроническом течении — обязательно сердце. Материал посылают свежим или консервируют в стерильном 30%-ном растворе глицерина. В положительных случаях в материале находят мелкие грамположительные палочки, располагающиеся одиночно, попарно или в виде скоплений. Возбудитель представляет собой прямую или слегка изогнутую мелкую тонкую палочковидную грамположительную бактерию без спор, капсул и жгутиков, размером (0,2–0,3) × (0,8–2,5) мкм. В препаратах из пораженных клапанов сердца при хроническом течении болезни возбудитель обнаруживают в форме нитей (рис. 2.3.1). Препараты из органов окрашивают по Граму и методом флюоресцирующих антител. В мазках, окрашенных флюоресцирующей сывороткой, находят светящиеся клетки бактерий типичной морфологии. При сомнительных и отрицательных результатах (слабое свечение, атипичные формы бактерий, отсутствие свечения) проводят бактериологическое исследование по общепринятой методике.

Рис. 2.3.1. Erysipelothrix rhusiopathiae: а — в препарате из патологического материала при острой форме; б — образование нитей на клапанах сердца при хронической форме течения болезни

Культуральные свойства. Посевы проводят на МПА, в МПБ или бульон Хоттингера, молоко, полужидкий агар (МПБ с 0,05–0,15% агара), кровяную сыворотку с углеводами, среду Сент Иваньи (агар с 0,1% кристалл-виолета и 1% азида Na). E. rhusiopathiae — факультативный анаэроб, в первых генерациях ведет себя как микроаэрофил. Температурный оптимум 36–37 °С, рН 7,2–7,5.

В МПБ — слабое помутнение питательной среды, через 48–72 ч среда просветляется, на дне пробирки формируется незначительный осадок, поднимающийся при встряхивании в виде нежного облачка. На плотных средах образует мелкие росинчатые колонии (S-формы) с голубоватым оттенком. При хронической форме встречаются колонии R-формы. Посевы на плотных средах из-за малых размеров колоний лучше просматривать при помощи лупы. На желатине при посеве уколом через 6–10 дней от серовато-белого стержня отходят горизонтальные нежные бахромчатые отростки в виде «ершика». Из культур, выросших на питательных средах, готовят мазки, окрашивают по Граму и флюоресцирующей сывороткой. При обнаружении бактерий, типичных для возбудителя рожи свиней по морфологическим, тинкториальным и культуральным свойствам, у них изучают ферментативные, серологические и патогенные свойства.

Биохимические свойства. Возбудитель рожи разлагает с образованием кислоты без газа глюкозу, лактозу, галактозу, мальтозу; не ферментирует сахарозу, маннит, рамнозу, дульцит, эскулин; выделяет сероводород; не образует индол, каталазу; не растет в МПБ с 8,5% хлорида натрия; вирулентные штаммы синтезируют гиалуронидазу.

Серологическая идентификация. Вид E. rhusiopathiae подразделяют на 22 серовара, которые обозначают цифрами. Наиболее распространены серовары 1-й и 2-й (ранее обозначали А и В). Часто (в 95% случаях) от больных свиней выделяют серовар 1-й.

Для видовой серологической идентификации используют обычную лечебно-профилактическую противорожистую сыворотку. На предметное стекло наносят каплю иммунной противорожистой сыворотки, разведенной физиологическим раствором (1:50), в которой затем тщательно суспендируют бактериологической петлей суточную агаровую исследуемую культуру. Положительный результат — быстрая агглютинация с образованием мелких плотных комочков.

Биопроба. Применяют для изоляции возбудителя из исследуемого материала, а также для определения патогенных свойств выделенных культур бактерий. Тканевый материал измельчают в ступке со стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:10 и вводят подкожно по 0,1–0,2 мл белым мышам массой 16–18 г. При наличии возбудителя животные погибают через 2–4 суток после заражения. В более поздние сроки погибают животные, зараженные суспензией из материала от свиней-хроников или слабовирулентными культурами. Материал из трупов мышей подвергают бактериологическому исследованию. Объектом биопробы могут служить голуби, погибающие через 2–5 суток. Менее чувствительные кролики, которые после внутривенного заражения погибают через 3–6 суток.

Бактериологический диагноз на рожу свиней считают установленным:

• при обнаружении возбудителя в исследуемом материале или в смешанной культуре (без выделения чистой культуры) методом флуоресцирующих антител (МФА);

• при выделении культуры с характерными для возбудителя свойствами на питательных средах из патологического материала;

• в случае гибели лабораторных животных и выделения из органов культуры возбудителя (даже если он не выделен из исходного материала).

Патогенность. Возбудитель эризипелоидоза патогенен для свиней, ягнят, индеек, кур, уток, голубей. Описаны случаи у ворон, воробьев, дроф, фламинго, а также у тюленей, дельфинов, белок, пятнистых оленей. Выделены от иксодовых клещей. У человека отмечается эризипелоид в форме местного серозного воспаления кожи (на ладонях и кистях рук, суставах запястья, на ногах) с расширением лимфатических ходов без некроза. Инкубационный период — от 1 до 8 дней. У свиней в неблагополучных хозяйствах распространено бактерионосительство (у 30–50% здоровых свиней в миндалинах и кишечнике).

Патогенез. При пероральном заражении бактерии оседают в миндалинах и солитарных фолликулах кишечника. При заражении через кожу — в лимфатических щелях пораженного участка, вокруг которого образуется местный воспалительный процесс. Через несколько дней, преодолев защитные барьеры, микроорганизмы проникают в кровь, вызывают септицемию. В организме развивается лихорадка, возникает нарушение тканевого обмена, дистрофические и некротические изменения в паренхиматозных органах, кровеносной системе. Это приводит к образованию тромбов, отеков и летальному исходу.

При благоприятном течении процесса, несмотря на то что возбудитель в начале болезни тормозит активность лейкоцитов и макрофагов РЭС (незавершенный фагоцитоз), с появлением агглютининов, преципитинов, антиагрессинов и комплементсвязывающих веществ сочетанное действие фагоцитоза с антителами приводит к гибели возбудителя.

Факторами передачи возбудителя служат мясные продукты и субпродукты, полученные от больных рожей свиней, а также корма, вода, почва, навоз, предметы ухода, загрязненные бактериями рожи. Механическими переносчиками бактерий могут быть домашние мухи и осенние мухи-жигалки, питающиеся кровью больных рожей животных.

Иммунитет. Заболеваемость свиней регистрируется в возрасте от 3 до 12 мес. Устойчивость поросят-сосунов связана с наличием у них колострального иммунитета, передаваемого иммунными свиноматками с молозивом. Переболевшие животные приобретают стойкий длительный иммунитет. Он определяется повышением активности макро- и микрофагов, усилением опсонизирующих свойств крови, образованием специфических агглютининов, преципитинов, антиагрессинов, комплементсвязывающих веществ, развитием аллергического состояния. Естественная устойчивость свиней к заболеванию рожей в значительной степени зависит от условий содержания и полноценности рациона кормления свиней.

Клинические признаки. Преимущественно болеют свиньи в возрасте от 3 мес. до года (спорадически встречается у крупного рогатого скота, ягнят, пушных зверей, грызунов, птицы; восприимчив человек). Болезнь протекает остро и хронически. Возможны сверхострое (молниеносное) и подострое течение.

Молниеносное течение характеризуется повышением температуры, резким угнетением, нарушениями со стороны сердечно-сосудистой системы и летальностью в течение нескольких часов.

Острое течение характеризуется признаками септицемии, воспалительной эритемой, повышением температуры до 42 °С и выше, угнетением, отказом от корма, слабостью задних конечностей. Животные зарываются в подстилку. Появляются признаки конъюнктивита, острого гастроэнтерита (вначале запор, затем диарея, возможна рвота). На коже появляются светло-красные пятна, которые затем приобретают темно-багровый цвет. Отмечается одышка, слабость сердечной деятельности, цианотичность кожи подгрудка, живота и конечностей. При несвоевременной лечебной помощи животные погибают в течение 2–4 суток.

При подостром течении развивается крапивница (рис. 2.3.2), температура повышается до 41 °С и выше. Отмечается угнетенность, отказ от корма, жажда. Через 1–2 суток на теле появляются плотные припухлости разных форм, состояние животного улучшается, и через 2–4 суток припухлости исчезают, эпителий в этих участках кожи омертвевает. Животное обычно выздоравливает, но возможны обострения с летальным исходом. Продолжительность подострой формы болезни от 7 до 12 суток.

Рис. 2.3.2. Клиническое проявление подострой формы рожи свиней (крапивница)

При переходе болезни в хроническую форму развиваются эндокардиты и артриты (рис. 2.3.3). Отмечается угнетенность, вялость, затрудненное дыхание, цианотичность кожи ушей и живота. Смерть может наступить внезапно от острой сердечной недостаточности.

Патолого-анатомические изменения. При вскрытии трупов регистрируется выраженная застойная гиперемия внутренних органов и экссудат с нитями фибрина в грудной, перикардиальной и брюшной полостях. Лимфатические узлы, селезенка, почки увеличены, красно-фиолетового или вишнево-фиолетового цвета, иногда с кровоизлияниями под капсулой. Легкие отечные, с кровоизлияниями. Трахеи и бронхи заполнены кровянисто-пенистой жидкостью. Сосуды сердца кровенаполнены, кровоизлияния на эпикарде. При хроническом течении на поверхности клапанов сердца красновато-серые разращения, напоминающие цветную капусту (веррукозный эндокардит), деформация костей, артриты (рис. 2.3.3).

Устойчивость. В жидких средах в запаянных ампулах сохраняются от 17 до 35 лет, в загнившем трупном материале — от 3 до 9 мес., в речной воде до 3–4 мес., в моче — до 6–7 мес., в фекалиях — до 3 мес., в почве — до 3–4 мес.

Температуру 50 °С выдерживают 15 мин, 70 °С — 5 мин. При варке в толстых кусках мяса погибают через 2,5 ч. Устойчивы к низким температурам, переживают в течение зимы. В копченой свинине выделены через 90 суток, в солонине — через 170 суток. Чувствительны к действию УФ-лучей и обычных дезинфицирующих растворов.

Рис. 2.3.3. Патолого-анатомические изменения в органах при роже свиней: а, б — серозно-фибринозный артрит; в — веррукозный эндокардит; г — эндокардит, кровенаполнение; д, е — увеличение органа, кровоизлияния под капсулу в селезенке и почках

Лечение. Для лечения применяют противорожистую сыворотку и антибиотики пенициллинового ряда. Сыворотку больным вводят подкожно по 1–1,5 мл на 1 кг живой массы. Пенициллин (экмоновоциллин, бициллин) применяют внутримышечно по 2–3 тыс. ЕД на 1 кг массы. Кроме того, используется и симптоматическая терапия.

Схема лабораторной диагностики и биопрепараты. См. приложения.

2.4. Возбудитель листериоза

Листериоз — инфекционная зооантропонозная болезнь, характеризующаяся поражением центральной нервной системы, репродуктивных органов (аборты), молочной железы (маститы), признаками септицемии. Протекает остро и хронически, возможно бессимптомное бактерионосительство.

Возбудитель — патогенные виды Listeria monocytogenes и L. ivanovii. Род — Listeria. Листериоз животных учитывается с 1956 г. Регистрация и учет листериоза у людей как самостоятельной нозологической единицы введены Минздравом РФ в 1992 г. Листериоз животных подлежит обязательной регистрации как особо опасная болезнь животных с 2008 г.

Морфология и тинкториальные свойства. Листерии — мелкие полиморфные палочки, располагающиеся одиночно, парами, напоминающими иногда римскую цифру пять, или по несколько штук параллельно, редко образуют короткие цепочки из палочек c закругленными концами (рис. 2.4.1). Размеры: длина 0,8–4,0 мкм, ширина 0,3–0,5 мкм. По Граму молодые культуры красятся положительно, старые — отрицательно или не определяются. Подвижны, имеют длинный полярный жгутик (рис. 2.4.1), который образуют при температуре 20–22 °С (но не при 37–38 °С). У некоторых штаммов клетки теряют жгутик и лишаются подвижности. Спор не образуют. При культивировании на сывороточных средах могут формировать капсулу.

Рис. 2.4.1. Морфология листерий: а — расположение листерий; б — длинный полярный жгутик листерий

Культуральные свойства. Листерии– строгие аэробы или факультативные анаэробы. На МПА (лучше агар с добавлением 1% глюкозы и 2–3% глицерина) образуют мелкие росинчатые колонии S-формы (при падающем свете — просвечивающиеся, беловатые с перламутровым оттенком, при проходящем свете — голубоватые). На кровяном агаре образуют зону бета-гемолиза (рис. 2.4.2). В МПБ — слабое помутнение среды, через 5–7 дней образуется слизистый осадок (при встряхивании поднимается в виде «косички»). Желатин не разжижают. Рост по уколу через 10 дней дает перпендикулярное разрастание в глубину желатины. Глубинные колонии чечевицеобразные.

Температурный оптимум 35–37 °С (растут в пределах от 20–37 °С).

Биохимические свойства. Листерии разлагают через 18–24 ч с образованием кислоты без газа глюкозу, мальтозу, рамнозу, салицин, трегалозу. Медленное кислотообразование на лактозе и сахарозе. Не расщепляют маннит, дульцит, сорбит, арабинозу. При росте в МПБ обесцвечивают индикаторные среды с метиленовым синим, нейтральротом, метилротом, конгоротом, амидо-черным. Биохимические свойства листерий непостоянны.

Токсигенность. Листерии выделяют термолабильный гемолизин, который в результате активизации цистеином вызывает гемолиз эритроцитов, а также липолитический фактор, обуславливающий цитолиз культуры макрофагов. При разрушении листерий освобождается эндотоксин, индуцирующий характерные признаки листериоза.

Серологическая идентификация. Серологические методы применяют в хозяйствах, неблагополучных по листериозу, для выяснения эпизоотической ситуации. Используют пробирочную РА и РСК. Диагностический титр РА для крупного рогатого скота и лошадей 1:400 (1:200 — сомнительный), для овец, коз и свиней — 1:200 (1:100 — сомнительный), для кроликов — 1:50 (1:25 –сомнительный). В РСК исследуют сыворотки крови, разведенные 1:10. Применяют также РНГА, ИФА.

Идентификационные признаки L. monocytogenes: а) продукция основных факторов патогенности — гемолизина и фосфолипазы; б) ферментация рамнозы и отсутствие ферментации ксилозы; в) патогенность для лабораторных животных.

Современные подходы к индикации возбудителя листериоза:

а) применение ПЦР при массовом исследовании проб в качестве сигнального метода;

б) разработаны транспортная, селективные и накопительные питательные среды для выделения возбудителя листериоза, иммунофлюоресцентные листериозные иммуноглобулиновые конъюгаты;

в) сконструированы листериозные магноиммуносорбентные тест-системы для иммуноферментного и количественного иммунофлюоресцентного анализов, позволяющие исследовать пробы из внешней среды с высокой степенью загрязнения неограниченного объема и низкой концентрацией патогена.

Современные подходы к экспресс-идентификации L. monocytogenes:

а) хромогенные агары для селективного роста и дифференциации видов L. sp.;

б) наборы для быстрой латекс-агглютинации всех подвижных листерий;

в) набор для биохимической идентификации листерий в планшетах;

г) иммунохроматографический тест для идентификации листерий (после двухстадийного обогащения);

д) ПЦР тест-система «Листер».

Биопроба. Метод применяется для обнаружения листерий в исследуемом материале и изучения патогенных свойств возбудителя. В первом случае тканевой суспензией головного мозга заражают 2–3 белых мышей подкожно или внутрибрюшинно по 0,3–0,5 мл. В положительном случае мыши погибают через 2–6 суток (особенно чувствительны 2–6-дневные мышата, которые гибнут через 18–36 ч). При вскрытии обнаруживают множественные некротические очажки в селезенке, печени, почках. Материал подвергают бактериологическому исследованию, выделяют чистую культуру и идентифицируют. С целью идентификации используют также РА на стекле со специфической антилистериозной сывороткой в разведении 1:50. Серотип идентифицируют с использованием типовых сывороток. Видовую принадлежность листерий можно установить на препаратах — мазках из культуры или из патологического материала, — обработанных флуоресцирующей специфической сывороткой.

Патогенность. Листериоз представляет опасность для 12 видов домашних и 91 вида диких животных. Резервуар и источники инфекции — многие виды диких и синантропных грызунов, а также различные объекты внешней среды. Болезнь поражает домашних и сельскохозяйственных животных (свиней, мелкий и крупный рогатый скот, лошадей, кроликов, реже кошек и собак), а также домашнюю и декоративную птицу (гусей, кур, уток, индюшек, голубей, попугаев и канареек). Листерии найдены у лисиц, норок, енотов, песцов, диких копытных, птиц, в рыбе и продуктах моря, во многих природных средах. Особенно благоприятной средой для их размножения являются поверхностные слои некачественного силоса. Возбудитель выделяется из организма с различными секретами (моча, молоко, кровь, сперма, ликвор, ректальная слизь, околоплодные воды и др.). Период заразности животных длится неопределенно долго. Болеют животные всех возрастов. Особенно чувствительные молодняк и беременные. Сезонность характерна только для овец. У других видов животных наблюдается в любое время года. Листериоз проявляется спорадически, редко в виде эпизоотии. Характерен длительный период микробоносительства.

У свиней протекает в виде смешанных инфекций. Стационарность листериоза обеспечивается наличием почвенных очагов и биологических резервуаров.

Животные заражаются через воду и корма, инфицированные листериями, от грызунов или их трупов. Определенную роль в поддержании стационарных очагов болезни играют кровососущие насекомые, особенно пастбищные клещи. Заражаясь от грызунов и других больных животных, они способствуют распространению инфекции, передавая бактерии другим животным.

Факторы, способствующие возникновению листериоза у животных: неполноценное и однотипное кормление, уплотненное содержание животных на ограниченной территории, беременность, незаразные и паразитарные болезни, наличие в стаде листерионосителей.

Патогенез. Инкубационный период 7–30 суток. Различают острое, подострое и хроническое течение болезни. Проявляется в формах: нервной, септической, смешанной, бессимптомной, а также с преимущественным поражением половых органов и вымени. У крупного и мелкого рогатого скота чаще поражается нервная система (некоординируемые движения, судороги, приступы буйства, парезы нижней челюсти и отдельных групп мышц, потеря зрения, конъюнктивит). При поражении половой системы — аборты, задержание последа, метриты. Иногда возникает мастит.

У телят и ягнят чаще всего листериоз протекает в виде септицемии. У взрослых свиней отмечают исхудание, анемию, кашель, нарушение координации движений, абсцессы в различных органах и тканях, аборты и рождение мертвых поросят. У поросят чаще наблюдают поражение нервной системы. У птиц характерны потеря аппетита, угнетение, малоподвижность, конъюнктивит, слабость, судороги, параличи (рис. 2.4.2).

Входными воротами инфекции могут быть слизистые оболочки ЖКТ и респираторного тракта, глаза, а также поврежденные кожные покровы.

При лимфогенном и гематогенном распространении возбудителей возникает острое лихорадочное состояние и происходит фиксация листерий в лимфатических узлах и внутренних органах — миндалинах, легких, в печени и селезенке, почках и надпочечниках, ЦНС и др., где происходит размножение бактерий. Воспалительный процесс в лимфатических узлах сопровождается их увеличением, но нагноение не развивается.

В тяжелых случаях заболевание приобретает черты листериозного сепсиса; при этом в лимфатических узлах и внутренних органах (включая ЦНС) формируются мелкие многочисленные некротические узелки (листериомы), в состав которых входят листерии, ретикулярные и моноцитарные клетки, ядерный детрит, измененные полиморфноядерные лейкоциты.

При беременности листериомы могут формироваться в плаценте, что приводит в последующем к инфицированию плода с развитием у него генерализованной формы инфекции. Возникновению заболевания способствуют иммунодефицитные состояния и опухоли.

Рис. 2.4.2. Листериоз: а — росинчатые колонии листерий на МПА; б — β-зона гемолиза листерий на кровяном агаре; в — конъюнктивит у овцы при листериозе; г, д, е — парезы и параличи у коровы, поросят и птиц при нервной форме листериоза

Антигенная структура. L. Monocytogenes включает 18 сероваров. В настоящее время различают три основных серовара, объединенных в две серогруппы. Серовары 1-й, 3-й, 4-й имеют подтипы a, b, c, d, e. Наиболее часто встречаются серовары 1, 1/2а, 4а, 4b.

С серологической принадлежностью совпадают фаготипы листерий: 1 фаготип лизируется фагом L2A (1 серогруппа); 2 фаготип лизируется фагом L4A (2 серогруппа).

Иммунитет. В процессе переболевания листериозом в крови животных накапливаются агглютинины и комплементсвязывающие вещества. У переболевших развивается стойкий постинфекционный иммунитет.

Диагностика. В лабораторию посылают трупы мелких животных, от крупных животных: голову (головной мозг), селезенку, печень, почки, пораженные участки легких; для прижизненной диагностики — абортированный плод с оболочками, истечения из половых органов, секрет пораженной доли вымени.

В случае необходимости кровь или сыворотку крови от больных или подозреваемых в заболевании животных.

Лабораторная диагностика листериоза. Прямое обнаружение возбудителя:

1. Микроскопия мазков из исходного материала.

2. Посевы на питательные среды.

3. Отбор подозрительных колоний и идентификация выделенных культур по культуральным и тинкториальным свойствам, по биохимической активности, по серологическим свойствам.

4. Постановка биопробы.

5. РСК, РА, РНГА, ИФА.

Устойчивость. При температуре 55 °С листерии погибают в течение 1 ч, 58 °С — через 30 мин, 70 °С — через 20 мин, 100 °С — в течение 5–10 мин. Возбудитель инактивируется 0,5–1,0%-ными растворами формалина, 3–5%-ными растворами хлорамина, 5%-ным раствором фенола. L. monocytogenes образует биопленки, что обуславливает устойчивость к дезинфекционным средствам.

Профилактика листериоза: комплектация ферм животными из благополучных по листериозу хозяйств; карантинирование вновь поступающих животных; клинический осмотр и при необходимости лабораторные исследования животных; обеспечение животных полноценными кормами; соблюдение ветеринарно-санитарных требований, проведение профилактических дезинфекций, дезинсекций и дератизаций.

Экономический ущерб при листериозе складывается из высокой летальности (70–90%); снижения продуктивности животных; потери приплода и новорожденного молодняка; затрат на лечебно-профилактические и карантинно-ограничительные мероприятия.

Схема лабораторной диагностики и биопрепараты. См. приложения.

Глава 3. ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ СПОРООБРАЗУЮЩИЕ БАКТЕРИИ

3.1. Возбудитель сибирской язвы

Сибирская язва — остропротекающее инфекционное заболевание сельскохозяйственных, диких животных, а также человека, характеризующееся септицемией, лихорадкой, кровоизлияниями в ткани и органы, образованием карбункулов и часто завершающееся летальным исходом. Возможно сверхострое или молниеносное течение (у крупного и мелкого рогатого скота). У свиней часто протекает с поражением заглоточных лимфатических узлов.

Возбудитель сибирской язвы — Bacillus anthracis, род Bacillus.

Под разными названиями заболевание было описано с незапамятных времен Гомером, Гиппократом, Цельсием. В 1788 г. название болезни дал С. С. Андреевский, штабной лекарь Челябинского округа. Возбудитель болезни обнаружен А. Поллендером (Германия) в 1849 г., К. Давеном (Франция) в 1850 г., Ф. А. Брауэлем, профессором Дерптского ветучилища, в 1857 г. Детально сибирскую язву изучили Р. Кох (1876), Л. Пастер (1877) и Л. С. Ценковский (1883).

Морфологические и тинкториальные свойства. Возбудитель — крупная неподвижная грамположительная палочка длиной 6–8 мкм и шириной 1,0–1,5 мкм. Содержит дифференцированный нуклеоид (ядро). В мазках располагается одиночно или, чаще, цепочками. Концы бацилл в окрашенных препаратах как бы срезаны под прямым углом.

Высокая устойчивость возбудителя сибирской язвы к неблагоприятным факторам обуславливается тем, что в организме он образует капсулу, вне организма — спору (рис. 3.1.1 а, б). Капсула образуется в восприимчивом и неиммунном организме, а также иногда на средах с добавлением крови или сыворотки. Капсула выполняет защитную функцию и является носителем вирулентности. Бескапсульные штаммы авирулентны. Споры появляются при доступе кислорода воздуха, недостатке питательных веществ и даже в дистиллированной воде при 12–42 °С. Споры располагаются посередине микробной клетки и имеют овальную форму.

Рис. 3.1.1. Bacillus anthracis: а — начальный этап образования споры (с), цитоплазматическая мембрана врастает внутрь клетки и образует предспоровую мембрану (пм); б — дальнейший этап образования споры (с), видны сформировавшиеся споровые оболочки (со), экзоспорум (экз) и частично лизированный спорангий (спр). х80 000 (Авакян А. А., Кац Л. Н., Павлова И. Б., 1974)

На питательной среде при температуре 37 °С молодые споры прорастают через 1–2 ч, старые — через 5–7 ч. В каштановых и черноземных почвах в летнее время споры могут прорастать, образуя вегетативные клетки, которые с наступлением осени снова превращаются в исходные формы. На рис. 3.1.1 представлен процесс формирования спор у B. anthracis.

Культуральные свойства. B. anthracis — факультативный анаэроб, температурный оптимум 35–37 °С, рН 7,2–7,4. К питательным средам неприхотлив. С целью выделения культуры возбудителя исследуемый материал засевают в МПБ, на МПА или в бульон и агар Хоттингера.

На МПА B. anthracis образует колонии R-формы, которые под малым увеличением микроскопа имеют вид локонов, получивших название «львиная грива», иногда S-формы или переходные RO-формы (рис. 3.1.2 в, г). На МПБ рост возбудителя характеризуется образованием на дне пробирки рыхлого ватообразного осадка при сохранении прозрачности питательной среды, после встряхивания осадок разбивается на хлопья. На МПЖ — рост в виде перевернутой елочки, спустя 2–3 дня желатина разжижается в виде воронки — пептонизируется (рис. 3.1.2 д).

На питательных средах, содержащих сыворотку крови, и в атмосфере с повышенным содержанием оксида углерода (IV) на МПА образуются гладкие колонии S-формы, а на МПБ — рост в виде диффузного помутнения среды.

При значительной контаминации материала посторонней микрофлорой (сырье животного происхождения, объекты внешней среды) посев делают на селективный агар (расплавленный МПА — 100 мл, сульфат полимиксина М — 0,5 мл, невиграмон — 0,5 мл, гризеофульвин — 1 мл, моющее средство «Прогресс» — 10 мл, фенолфталеинфосфат натрия — 0,1 мл). Через 18–24 ч культивирования на внутреннюю поверхность крышки чашки Петри наносят 1–2 мл 25%-ного водного раствора аммиака, чашку переворачивают. Колонии В. anthracis остаются бесцветными, колонии бактерий с фосфатазной активностью розовеют.

Биохимические свойства. У возбудителя сибирской язвы выделены ферменты: липаза, протеаза, диастаза, дегидраза, желатиназа, пероксидаза, каталаза, цитохромоксидаза и др. Ферментирует с образованием кислоты без газа активно — глюкозу и мальтозу, медленно — сахарозу, фруктозу, трегалозу и декстрин. Очень слабое кислотообразование возможно на средах с глицерином и салицином. Бацилла антракса не ферментирует арабинозу, рамнозу, галактозу, маннозу, маннит, дульцит, сорбит, инозит. Выделяют аммиак, некоторые штаммы образуют сероводород. Утилизирует цитраты, образует ацетилметилкарбинол (положительная реакция Фогеса — Проскауэра). Проявляет лецитиназную активность. Редуцирует метиленовую синь. Слабо восстанавливает нитраты в нитриты. Активно вырабатывает желатиназу и протеазу и поэтому быстро гидролизует желатину и свернутую сыворотку.

Токсигенность. Экзотоксин, вырабатываемый бациллой антракса, состоит из трех компонентов (факторов): EF-эдематогенный фактор, PA-протективный, LF-летальный (соответственно, 1, 2 и 3 факторы). EF-фактор вызывает местную воспалительную реакцию (отек и разрушение тканей), РА-фактор обладает иммуногенным действием (носитель защитных свойств), в чистом виде нетоксичен. LF-фактор в чистом виде нетоксичен, токсичность проявляет в смеси с фактором 2. РА и LF-факторы — гетерогенные белки. Каждый из трех факторов серологически активен и обладает выраженными антигенными свойствами. Все три фактора составляют синергическую смесь, оказывающую одновременно эдематогенное и летальное действие.

Патогенез. Бацилла антракса обладает высокой инвазивностью и легко проникает через царапины кожных покровов и поврежденные слизистые оболочки. Заражение происходит преимущественно алиментарным путем. Сибиреязвенные бациллы, быстро размножаясь в крови больного животного, заполняют кровеносное русло и ткани. Одна палочка через 15 ч дает потомство в 1 млрд новых бацилл. Она вырабатывает сложный экзотоксин, нарушается порозность (проницаемость) сосудов, и наблюдаются кровоизлияния в ткани и органы, отмечается выраженный гемолиз эритроцитов, снижается свертываемость крови (рис. 3.1.2 а, б).

Рис. 3.1.2. Bacillus anthracis: а — капсулы и споры; б — споры; в — колонии «львиная грива», г — колонии R, S и RO-форм; д — в МПБ — ватообразный рыхлый осадок, в МПЖ — разжижение желатины; е — реакция «жемчужное ожерелье» на среде с пенициллином; ж — проба с бактериофагом (в пробирках метод стекающей капли, в чашке Петри — микрометод)

Капсульное вещество ингибирует опсонизацию, экзотоксин разрушает фагоциты, поражает центральную нервную систему, вызывает отек, развивается гипергликемия, повышается активность щелочной фосфатазы. В крови резко снижается содержание кислорода. Нарушаются метаболические процессы, и наступает гибель животного.

Из организма возбудитель выделяется с истечениями из естественных отверстий с бронхиальной слизью, слюной, молоком, мочой, испражнениями.

Антигенная структура. B. anthracis имеет соматический (С) и капсульный антиген (Р). С-антиген представляет собой полисахаридный комплекс. Имеется у вирулентных и авирулентных штаммов бацилл. Он не создает иммунитета и не определяет агрессивных функций микроба. Р-антиген — сложный полипептид d-глутаминовой кислоты. Является группоспецифическим, так как дает перекрестные серологические реакции с полипептидом B. subtilis, B. cereus B. megaterium. Также все три компонента сибиреязвенного экзотоксина являются активными антигенами.

Иммунитет. В результате естественного заражения и переболевания сибирской язвой возникает длительный и стойкий иммунитет. Он обусловлен протективным антигеном (РА) и является антитоксическим.

Лабораторная диагностика сибирской язвы основана на результатах бактериологического исследования, которое включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале (методом световой и люминесцентной микроскопии, а также биопробы), выделение чистой культуры и ее идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим признакам. При нечетких результатах применяют и другие методы.

Для исследования в лабораторию направляют ухо — с той стороны, на которой лежал труп. На ухо накладывают две лигатуры: одну ближе к основанию уха, вторую — отступя от первой на 1 см. Между ними делают разрез, края которого прижигают раскаленным металлическим предметом или химическими средствами (формалин, фенол, кристаллический марганцовокислый калий). Помимо уха, в лабораторию можно направить мазок из кровянисто-пенистых истечений из естественных отверстий (носовая, ротовая полость, органы размножения и выделения); от трупов свиней — заглоточные лимфатические узлы и участки отечной соединительной ткани. Если подозрение на сибирскую язву возникло в ходе вскрытия, его прекращают и на исследование направляют часть селезенки.

Нативный материал помещают в чистую посуду (пробирки, банки). Высушенные мазки кладут в чашки Петри, которые оборачивают плотной бумагой. На упаковке делают надпись «Мазок не фиксирован!». Посуду с материалом помещают во влагонепроницаемую тару, обвязывают, пломбируют или опечатывают, делают надпись «Верх. Осторожно!» и срочно с сопроводительными документами с нарочным направляют в лабораторию.

Бактериоскопия препаратов из исходного материала. Из поступившего в лабораторию материала готовят мазки, окрашивают по Граму, на капсулы (метод Михина, Ольта и др.), а также сибиреязвенными люминесцирующими сыворотками. В окрашенных мазках из трупного материала возбудитель обнаруживают в виде крупных грамположительных палочковидных бактерий, располагающихся одиночно, парами, короткими цепочками. Концы палочек, обращенные друг к другу, резко обрублены, свободные концы закруглены, клетки окружены капсулой. В отдельных случаях, особенно в мазках из материала, полученного от свиней, форма клеток может быть нетипичной: короткие, толстые, изогнутые или зернистые палочки со вздутием в центре или на концевых частях бактерий.

Предварительный ответ в хозяйство, откуда поступил материал, дают немедленно по результатам бактериоскопического исследования.

Биопроба. В качестве объекта биопробы на сибирскую язву используют белых мышей или морских свинок. При этом тканевой суспензией заражают подкожно двух белых мышей по 0,2–0,5 мл или морских свинок по 0,5–2 мл. Наблюдение ведут в течение 10 суток. При наличии возбудителя животные погибают обычно через 1–3 суток. Павших животных исследуют с выделением культуры возбудителя.

Если в ходе указанных исследований выделена бактерия, типичная для В. anthracis по морфологическим, тинкториальным и культуральным свойствам, патогенная для лабораторных животных, то дальнейшие исследования не проводят и диагноз считают установленным.

При получении сомнительных результатов вышеперечисленными методами исследований проводят дополнительные методы диагностики сибирской язвы.

Тест «жемчужного ожерелья» (рис. 3.1.2 е) разработан для определения чувствительности выделенного микроорганизма к пенициллину. В две колбочки (пробирки) с расплавленным МПА (температура 45–50 °С) добавляют пенициллин из расчета 0,05–0,5 ЕД/мл и переносят в две чашки Петри, в третью чашку наливают обычный МПА. После застывания агара из него вырезают пластинки размером 1,5 см², которые переносят на предметные стекла и помещают в чашки Петри. На каждую пластинку бактериологической петлей наносят исследуемую трехчасовую бульонную культуру. Чашки выдерживают 1–3 ч в термостате. Затем посевы просматривают под микроскопом с объективом х40 и иммерсионной системой. Перед просмотром зону роста накрывают покровным стеклом. Сибиреязвенные микробы на МПА с пенициллином приобретают шаровидную форму, а цепочки — вид «жемчужного ожерелья». Спорообразующие сапрофитные аэробы в аналогичных условиях растут в обычной форме. На агаре без пенициллина сибиреязвенные микробы образуют длинные цепочки из типичных палочек.

Для определения чувствительности к сибиреязвенному бактериофагу (рис. 3.1.2 ж) культуру или материал засевают на скошенный МПА, затем на поверхность среды наносят каплю бактериофага в рабочем титре и посевы выдерживают при температуре 37–38 °С 24 ч. В случае принадлежности культуры к В. anthracis на поверхности МПА в зоне нанесения бактериофага остается стерильная зона при наличии роста микроорганизма на остальных участках среды.

Для идентификации В. аnthracis методом люминесцирующих антител используют флуоресцирующую адсорбированную сыворотку, не дающую перекрестных реакций с антигеннородственными сапрофитными бациллами.

Гемолитическую активность исследуемой культуры определяют посевом на 5%-ной кровяной МПА или кровяной МПБ. При положительной реакции вокруг колоний образуются зоны гемолиза, бульон обесцвечивается.

Наличие жгутиков исследуют посевом в 0,3%-ной МПА или методом «придавленной капли» (см. тему «Исследование бактерий на подвижность»).

Для контроля кожевенно-мехового сырья на наличие возбудителя сибирской язвы и при исследовании загнившего материала, который нельзя подвергать обычному бактериологическому исследованию, диагноз ставят на основании обнаружения антигенов возбудителя в материале при помощи реакции кольцевой преципитации (см. тему «Серологические методы диагностики. Реакция преципитации»).

При исследовании свежего тканевого материала используют реакцию диск-преципитации. В стерильную пробирку вносится 0,5–1,0 мл преципитирующей сыворотки, на поверхность которой наслаивается расплавленный и охлажденный до 45 °С 1%-ный агаровый гель высотой 5–7 см. На поверхность застывшего агара вносится 1,0–1,5 мл МПБ и делается посев исследуемого материала (37–38 °C 16–20 ч). При положительной реакции в средней части столбика агарового геля обнаруживают «диск» преципитации.

Клинические признаки. Инкубационный период составляет от 1 до 3 суток. Протекает по типу септицемии (рис. 3.1.3 а, б). Различают молниеносное (сверхострое), острое и подострое течение (рис. 3.1.3 в, г, д).

Молниеносное течение более характерно для крупного и мелкого рогатого скота. Характеризуется резким возбуждением, повышением температуры, учащением пульса, дыхания, появлением судорог, парезов конечностей, атонией мышц, кровянисто-пенистыми истечениями из естественных отверстий и летальным исходом. Продолжительность от 1–2 до нескольких часов.

Рис. 3.1.3. Сибирская язва: формы течения, патолого-анатомическая картина: а — B. anthracis быстро размножается в крови; б — кровеносные сосуды наполнены темной, похожей на деготь «лаковой кровью» (гемолиз); в — при сибирской язве труп вздут, кровянисто-пенистые истечения из естественных отверстий; г — молниеносная форма чаще поражает крупный рогатый скот и овец (из рта, носа, заднего прохода вытекает темная кровь); д — у свиней чаще всего поражаются заглоточные лимфатические узлы, на языке и небе образуются карбункулы; е — селезенка черно-красного цвета, резко увеличена

Острое течение характеризуется высокой температурой (до 42–43 °С), угнетением, отказом от корма, нарушениями со стороны сердечно-сосудистой и нервной систем, точечными кровоизлияниями на слизистых, конъюнктивитом, отеками глотки, гортани.

У крупного рогатого скота возможны явления тимпании, у лошадей — колики, у беременных животных — аборты. Через 2–3 суток — кровянисто-пенистые истечения из естественных отверстий и летальный исход.

Для подострого течения болезни характерны те же клинические признаки, что и для острого, но с более длительным сроком проявления (от 6 до 8 суток).

При остром и подостром течении сибирской язвы на месте внедрения возбудителя и вторично в других участках возможно появление карбункулов.

У свиней заболевание характеризуется воспалением в области гортани, глотки, заглоточных, подчелюстных лимфатических узлов, появлением в них и на языке карбункулов (рис. 3.1.3 д).

В редких случаях заболевание может принять абортивную форму.

Патолого-анатомические изменения. При осмотре сибиреязвенного трупа отмечается следующее: труп вздут, трупное окоченение не наступает, кровянисто-пенистые истечения из естественных отверстий, кровь темная, несвернувшаяся, кровоизлияния в подкожную клетчатку. Вскрывать на сибирскую язву категорически запрещается! Если труп случайно вскрыт, то отмечают следующие патолого-анатомические изменения: резкое увеличение селезенки, лимфатических узлов. Консистенция селезенки дряблая, на разрезе стекает в виде дегтеобразной массы (рис. 3.1.3 е). Кровоизлияния в паренхиматозных органах, в мышцах сердца и возможно во все полости и ткани. У свиней отмечаются студенисто-геморрагические инфильтраты в области гортани, трахеи, на языке, поражение миндалин и региональных лимфатических узлов (рис. 3.1.2 д).

Устойчивость. Сухой жар при 120–140 °С убивает споры через 2–3 ч, при 150 °С — через 1 ч, текучий пар при 100 °С — через 12–15 мин, автоклавирование при 110 °С — через 5–10 мин, кипячение — через 1 ч. Резистентность спор зависит от того, насколько быстро они сформировались. Так, споры, образовавшиеся при 18–20 °С, более резистентны, чем споры, сформировавшиеся при температуре 35–38 °С.

Схема лабораторной диагностики и биопрепараты. См. приложения.

Глава 4. ПАТОГЕННЫЕ АНАЭРОБЫ

4.1. Возбудитель столбняка

Столбняк — острая неконтагиозная раневая инфекция, при которой происходит поражение нервной системы экзотоксином микроба Сlostridium tetani. К возбудителю восприимчивы все виды домашних животных, особенно чувствительны лошади. Болеет и человек. Болезнь характеризуется повышенной возбудимостью и судорожными сокращениями мускулатуры тела, приводящими к асфиксии.

Возбудитель — Сl. tetani. Название болезни и первое описание ее клинических проявлений дано Гиппократом. Столбнячная палочка впервые обнаружена Н. Д. Монастырским (1883) в трупах умерших людей и А. Николайером (1884) в абсцессах при экспериментальном столбняке у животных. Чистую культуру возбудителя выделил японский бактериолог Ш. Китазато (1887). Позднее он получил столбнячный токсин (1890) и совместно с Э. Берингом предложил антитоксическую сыворотку для лечения столбняка. Французский иммунолог Г. Рамон разработал метод получения столбнячного анатоксина (1923–1926). В нашей стране в ветеринарии применяется столбнячный анатоксин, изготовленный по методу Г. И. Елизаревского (1954).

Токсигенность. Возбудитель столбняка вырабатывает экзотоксин. Он состоит из двух фракций: тетаноспазмина и тетанолизина. Тетаноспазмин является летальным фактором, вызывающим поражение нервной ткани, судорожное сокращение поперечно-полосатых мышц. Он синтезируется внутри бактериальной клетки и, диффундируя через оболочку, поступает в среду или освобождается при гибели клетки.

Тетанолизин вызывает лизис эритроцитов.

Морфология и тинкториальные свойства. Сl. Tetani — тонкая грамположительная палочка размерами (3–12) × (0,8) мкм, образует терминально расположенную спору. Диаметр спор значительно превышает диаметр вегетативной клетки, вследствие чего микроб приобретает вид «барабанной» палочки (рис. 4.1.1). Подвижная — перитрих (рис. 4.1.2).

Культуральные свойства. Сl. Tetani — строгий анаэроб, температурный оптимум 37 °С, рН — 7,4–7,9. Исследование проводят с целью обнаружения токсина и выделения культуры возбудителя для последующего определения ее токсигенности. Чтобы выделить чистую культуру, материал высевают на среду Китта — Тароцци, содержащую 0,5% глюкозы. Половину посевов (пробирки) прогревают при 80 °С в течение 1 ч.

Через 24 ч на среде Китта — Тароцци возбудитель дает интенсивное помутнение среды с незначительным газообразованием. Через 48–72 ч наступает просветление среды, а на дне пробирки образуется осадок. Для культуры характерен запах жженого рога (вследствие протеолиза белков).

Через 4–5 суток у полученной культуры определяют токсигенные свойства. При необходимости первичные посевы, содержащие типичные клетки возбудителя, прогревают при 80 °С 20 мин и делают дробный посев на глюкозо-кровяной агар в чашках Петри. На кровяном агаре Сl. tetani образует нежные колонии с отростками и приподнятым центром, иногда мелкие круглые колонии. Некоторые колонии окружены зоной гемолиза.

Рис. 4.1.1. Сlostridium tetani в виде «барабанных палочек»

Рис. 4.1.2. Сl. tetani — перитрих, жгутики (состоят из белка флагеллина, длина достигает до 20–25 мкм, диаметр — до 15–20 нм)

Лабораторная диагностика столбняка основана на результатах бактериологического исследования. Клиническая картина столбняка характерна, поэтому материал направляют для лабораторного исследования в сомнительных случаях. Им служит раневой экссудат, кусочки ткани из глубоких слоев мест поражения.

Бактериологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методами световой микроскопии и биопробы, выделение чистой культуры и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, биохимическим и токсигенным свойствам.

Биохимические свойства. У чистых культур возбудителя исследуют биохимические свойства. Сl. tetani гидролизует желатину; не образует индол, лецитиназу; расщепляет до кислоты глюкозу, мальтозу, фруктозу; свертывает молоко; образует сероводород.

Иммунитет. Человек, лошади, свиньи, морские свинки не вырабатывают естественный противостолбнячный антитоксический иммунитет. У жвачных животных возможно накапливание столбнячного антитоксина в крови, что объясняется явлением иммунизирующей субинфекции, которому способствует размножение в рубце возбудителя столбняка с продукцией анатоксина, всасывание которого в небольших количествах вызывает накопление в крови антитоксинов.

Противостолбнячный иммунитет может иметь плацентарное и колостральное происхождение, что очень важно, так как новорожденные очень чувствительны к столбняку и нередки случаи заражения через пуповину, загрязненную Сl. tetani.

Патогенез. Заболевание развивается в результате попадания спор возбудителя в глубокие раны, после родовых травм, кастрации, обрезания хвостов или пуповины у новорожденных, если при этих операциях были нарушены правила асептики и антисептики. Возбудитель не обладает инвазивными свойствами и не распространяется по всему организму. Споры могут сохраняться в организме длительное время, не оказывая вредного воздействия, или быть фагоцитированными. Инкубационный период может длиться от нескольких дней (чаще 5–20) до нескольких месяцев. При наличии анаэробных условий и омертвевших субстратов возможно размножение возбудителя с выделением и накоплением токсина. Он по осевым цилиндрам, или по периневральным путям вдоль лимфатических щелей, или через кровь достигает двигательных ганглиев спинного мозга. Это приводит к рефлекторной возбудимости и судорожным титаническим сокращениям мышц. Смерть наступает в результате паралича дыхательного центра, асфиксии, вызванной спазмом глотки и бронхов, и остановки сердца.

Клинические признаки. Напряженность движений, осторожное жевание и глотание, переходящее в судорожное сокращение жевательных мышц головы. Затем в процесс вовлекаются мышцы шеи, туловища, хвоста и конечностей (рис. 4.1.3 а, б, в, г).

Животные стоят с напряженными, широко расставленными конечностями, с вытянутой шеей. Уши приподняты, глазные щели расширены или сужены, часто прикрыты выпавшим третьим веком. Ноздри расширены. Рот судорожно сжат, углы губ оттянуты и приподняты вверх, животное не в состоянии разжимать челюсти (рис. 4.1.3 д, е).

У крупного рогатого скота отмечается вздутие рубца, у лошадей — приподнят хвост, у слонов — хобот.

Птицы очень резистентны к столбнячному токсину.

Рис. 4.1.3. Клинические признаки столбняка: а, б, в, г — клинические признаки столбняка у животных (лошади, теленка, козы); д, г — столбняк у лошади и коровы (рот судорожно сжат, животные не в состоянии разжимать челюсти)

Биопроба. Применяют для обнаружения токсина в исследуемом материале, а также для подтверждения токсигенных свойств выделенной культуры возбудителя.

Для обнаружения токсина исследуемый материал растирают в физиологическом растворе, экстрагируют при комнатной температуре 1 ч, фильтруют. Его вводят подкожно в заднюю лапку двум-трем белым мышам по 0,5–1 мл или двум морским свинкам по 3–5 мл.

При наличии токсина через 48–96 ч у животных развивается тетаническое сокращение мышц отдельных групп, а затем всей мускулатуры. Животное погибает в позе с вытянутыми лапками и искривлением позвоночника в сторону лапки, в которую вводили материал. При наличии токсина исследования по выделению культуры возбудителя прекращают.

Схема лабораторной диагностики и биопрепараты. См. приложения.

4.2. Возбудитель ботулизма

Ботулизм — остропротекающая пищевая или кормовая токсикоинфекция, возникающая вследствие поедания кормов, содержащих токсин возбудителя. Заболевание проявляется параличом мышц глотки, языка, нижней челюсти и скелетных мышц. К ботулизму восприимчивы многие виды животных, в том числе птицы, а также человек. Из лабораторных животных восприимчивы белые мыши и морские свинки.

Возбудитель ботулизма — Clostridium botulinum. Выделен Ван Эрменгемом (1896) из колбасы, вызвавшей отравления людей (botulinum –колбаса). Возбудитель синтезирует нейротоксин.

Морфология и тинкториальные свойства. В препаратах из материала, окрашенных по Граму, Сl. botulinum обнаруживают в форме прямой или слегка изогнутой грамположительной палочки с закругленными концами, размером (0,6–1,4) × (4–9) мкм. Споры овальные, больше диаметра клетки, располагаются терминально или субтерминально, придавая клетке вид «теннисной ракетки» (рис. 4.2.1 а, б). Сl. botulinum подвергается обработке люминесцирующей антисывороткой (рис. 4.2.1 в). Возбудитель образует жгутики (часть бактерий из молодых и старых культур лишена жгутиков). Не формирует капсулу. Процесс формирования спор у Сl. botulinum представлен на рис. 4.2.2.

Культуральные свойства. Основное направление при лабораторной диагностике ботулизма — обнаружение ботулинического токсина. Выделение чистой культуры с испытанием ее токсигенных свойств проводят только при отрицательных результатах исследований на наличие токсина в материале.

Сl. botulinum — строгий анаэроб, температурный оптимум 30–35 °С, рН 7,2–7,4. Чтобы выделить культуру возбудителя, исследуемый материал высевают в два флакона со средой Китта — Тароцци, один из них прогревают при 80 °С 1 ч, затем оба флакона инкубируют. Рост возбудителя характеризуется постепенным помутнением среды (на 2–3 сутки), газообразованием. У культуры отмечают специфический запах прогорклого масла. В культуре обнаруживают типичные для возбудителя клетки бактерий. На 5–7 сутки инкубирования испытывают токсигенные свойства культуры (биопроба). Для выделения чистой культуры возбудителя первичные посевы прогревают при 80 °С 1 ч и дробно рассевают на глюкозо-кровяной агар в чашках Петри. Посевы инкубируют в анаэростате. Через 4–5 суток их просматривают. Колонии Сl. botulinum — круглые, с корневидными отростками, бесцветные или сероватые, с зоной бета-гемолиза.

Рис. 4.2.1. Clostridium botulinum: а, б — в чистой культуре (в виде «теннисной ракетки»); в — подвергается обработке люминесцирующей антисывороткой; г — белая мышь (биопроба на ботулизм — «осиная талия»)

Биохимические свойства. Возбудитель медленно разжижает желатину, пентонизирует молоко, ферментирует до кислоты и газа глюкозу, мальтозу, салицин, глицерин, адонит.

Лабораторная диагностика. В лабораторию направляют пробы корма, вызвавшего отравление; от павших животных — содержимое желудка, кишечника, кусочки печени, селезенки; от больных животных — кровь. Материал берут в течение двух часов после гибели животного.

Нативный материал исследуют одновременно на наличие токсинов и возбудителя. Кровь исследуют только на токсин и быстро, на месте, так как токсин в крови быстро разрушается.

Бактериологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии и его токсина методом биопробы, выделение чистой культуры и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным и токсигенным свойствам.

Биопроба применяется для обнаружения токсина в исследуемом материале или для определения токсигенных свойств выделенной культуры возбудителя. Сl. botulinum продуцирует токсины семи типов: А, В, С, D, E, F, G. Все семь сероваров экзотоксина иммунологически специфичны, что выявляют в реакции нейтрализации.

Рис. 4.2.2. Clostridium botulinum. А: а — 2 суток роста; б, в — 7 суток роста; видны слоистая клеточная стенка (кс), лизированный в центре клетки нуклеоид и мембранные структуры (мс), являющиеся инвагинатами цитоплазматической мембраны (цм); Б: Сформировавшиеся споры лежат в спорангии (спр) материнской клетки; в спорангии видны многочисленные мембранные структуры (мс); клеточная стенка (кс) и экзоспорум (экз). х90000 (Авакян А. А., Кяч Л. Н., Павлова И. Б., 1972)

Для обнаружения токсина исследуемый материал (20–30 г) растирают в физиологическом растворе (в соотношении 1:2), экстрагируют при комнатной температуре 2 ч, фильтруют через вату и делят на две части, одну часть прогревают при 100 °С 20–30 мин. Затем нативным и прогретым фильтратом заражают внутривенно или внутрибрюшинно двух белых мышей. Морских свинок заражают подкожно по 3–5 мл. При наличии ботулинического токсина животные, которым введен кипяченый фильтрат, остаются живыми, нативный — погибают на 2–5 сутки с характерной клиникой ботулизма: шаткая походка, учащенное дыхание, расслабление скелетной мускулатуры, западание брюшной стенки («осиная талия» — рис. 4.2.1 г).

При обнаружении в исследуемом материале токсина проводят его идентификацию. Для этого смешивают по 0,2 мл различных антисывороток в одной пробирке (А, В, С, D, Е), добавляют 1 мл экстракта, выдерживают 45 мин при 35–37 °С и вводят внутрибрюшинно двум белым мышам. Контрольным животным вводят смесь фильтрата с физиологическим раствором. При выживании мышей, зараженных смесью фильтрата и сыворотки, и при гибели контрольных токсин идентифицируют как ботулинический. Этот результат служит достаточным основанием для постановки положительного диагноза «ботулизм». При необходимости определяют тип токсина в РН: смешивают по 2,4 мл фильтрата и 0,6 мл типовых сывороток, выдерживают в термостате и ставят биопробу на мышах, как было описано выше.

Антигенная структура и токсигенность. Существуют 6 типов Сl. botulinum, которые продуцируют токсины типов А, В, С, D, E, F. Все токсины обладают иммунной специфичностью и выявляются в РН.

Токсины состоят из следующих токсических факторов: нейротоксин, гемолизин, липаза, протеаза.

Специфичность токсинов А, В и Е — очень высокая, С и D — ниже. Они не нейтрализуются антитоксинами А, В и Е, но небольшие дозы токсинов С и D перекрестно нейтрализуются большим количеством антитоксинов D и С соответственно. Перекрестная нейтрализация специфическими антисыворотками характерна также для токсинов Е и F.

В РА, РП и РСК в пределах типов А и В по антигенам бактериальных клеток выявлены отдельные серогруппы. У типа Е установлены три серогруппы. У типов С, D, F серогруппы не выявлены.

Иммунитет. Иммунитет — антитоксический. У переболевших животных невосприимчивости к повторному заражению и антитоксического иммунитета не возникает. При вакцинации анатоксином или анакультурой животные приобретают типоспецифическую невосприимчивость к заболеванию, вызванную накоплением в крови и тканях организма соответствующих антитоксинов.

Патогенность. К болезни восприимчивы животные многих видов независимо от возраста. Наиболее часто заболевают лошади и норки. Дикие плотоядные устойчивы к заболеванию.

Источником возбудителя инфекции является почва, навоз, вода, трупы, контаминированные Cl. botulinum, из которых споры возбудителя попадают в корма и при благоприятных условиях прорастают, выделяя при этом токсин.

Заражение животных происходит при попадании ботулинического токсина в пищеварительный тракт. Заболевание животных происходит обычно в теплое время года, которое протекает спорадически, реже в виде энзоотий.

Инкубационный период — от нескольких часов до двух недель.

Болезнь может протекать молниеносно, остро, подостро и, реже, хронически. У лошадей и крупного рогатого скота молниеносное течение характеризуется внезапной гибелью животных без каких-либо признаков болезни. Острое течение (длится от 1 до 4 дней), проявляется беспокойством, снижением рефлекторной чувствительности, нарушением координации движений, гиперемией или желтушностью видимых слизистых оболочек. Наблюдается слюнотечение, паралич нижней челюсти и языка, который выпадает изо рта. Летальность у животных достигает 70–95%.

У овец при остром течении отмечают нарушения координации движений, изгибание шеи, паралич языка и слюнотечение. Свиньи болеют редко. У них отмечают обильное слюнотечение, нарушения координации движений, слепоту, паралич жевательных мышц и глотки.

При подостром (до 7 дней) и хроническом (до 3–4 недель) течениях болезни у животных клинические признаки выражены слабее.

Патологическая анатомия. Патолого-анатомические изменения не характерны, однако часто отмечается желтушность подкожной клетчатки, катарально-геморрагическое воспаление слизистой оболочки кишечника, кровоизлияния в глотке и надгортаннике, на сердце и серозных покровах, отечность легких. Головной мозг отечен, нередко с кровоизлияниями. Селезенка, печень, почки — без видимых изменений.

Дифференциальная диагностика. Следует исключать у животных сибирскую язву, бешенство, болезнь Ауески, листериоз, стахиботриотоксикоз, отравления ядовитыми растениями и солями свинца. У лошадей — также инфекционный энцефаломиелит.

Устойчивость. Споры Сl. botulinum отличаются исключительной стойкостью. Они выдерживают кипячение при 100 °С в течение 6 ч, при 120 °С — 10 мин. Также устойчивы споры к низким температурам.

Подкисление продуктов и кормовых средств до рН = 3,0 –4,0, концентрации NaCl выше 10% надежно задерживает развитие возбудителя ботулизма. 10%-ная соляная кислота разрушает споры при комнатной температуре через 1 ч; формалин, разбавленный пополам с водой, — только через 24 ч.

Лечение. Промывают ротовую полость раствором перманганата калия, желудок — раствором двууглекислой соды. Применяют слабительные средства, теплые клизмы. Внутривенно вводят противоботулиновые антитоксические моно- или поливалентные сыворотки.

Схема лабораторной диагностики и биопрепараты: См. приложения.

4.3. Возбудитель эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота (эмкара)

Эмфизематозный (шумящий) карбункул (эмкар) — остропротекающая неконтагиозная инфекционная болезнь, характеризующаяся образованием быстро увеличивающихся крепитирующих газовых отеков (карбункулов) в крупных мышцах, хромотой и быстрым летальным исходом.

Болеет крупный рогаты скот (от 3 мес. до 4 лет), реже буйволы, овцы и козы. Человек невосприимчив. Встречается почти во всех странах мира.

В России эмкар регистрируется во всех регионах, но благодаря систематическим плановым вакцинациям — в виде единичных случаев.

Как самостоятельную болезнь эмфизематозный карбункул впервые описал в 1872 г. Ф. Шабер, затем, в 1875 г., О. Боллигер. До этого ее смешивали с сибирской язвой. В СССР формолвакцину изготовил в 1929 г. С. Н. Муромцев. В 1959 г. Ф. И. Каган и А. И. Колесова изготовили для вакцинации против эмкара концентрированную гидроокисьалюминиевую формолвакцину.

Возбудитель — Сlostridium chauvoei.

Морфология и тинкториальные свойства. Полиморфная палочка с закругленными концами длиной 1,5–9 мкм и шириной 0,5–1,6 мкм (в споровой форме имеет форму веретена, лимона, груши, шара). Образует центрально, терминально и субтерминально расположенные споры в культуре и тканях. Капсул не образует, подвижная — перитрих. При микроскопии обнаруживают отдельно или попарно лежащие палочки (рис. 4.3.1 а). В препаратах из патологического материала и из молодых культур окрашиваются грамположительные, из старых культур — грамотрицательные.

Культуральные свойства. Строгий анаэроб. Оптимальная температура 36–37 °С. Культивируется на средах с добавлением мышц, печени, мозга, крови, сыворотки крови — на МППБ, средах Китта — Тароцци, Хоттингера, Мартена, мозговой среде, глюкозо-кровяном агаре, агаре Цейслера и др. На жидких средах растет с интенсивным газообразованием, легким помутнением с последующим выпадением осадка и просветлением бульона. На плотных средах образует колонии в виде виноградного листа или в виде перламутровых пуговиц. На глюкозо-кровяном агаре колонии чаще образуют зону гемолиза и возвышение в центре.

Биохимические свойства. Обладает средней биохимической активностью. Ферментирует с образованием кислоты и газа: сахарозу, глюкозу, лактозу, мальтозу, галактозу, левулезу. Не образует индола. Некоторые штаммы продуцируют Н₂S. Молоко свертывает медленно.

Лабораторная диагностика. В лабораторию посылают кусочки пораженных мышц (лучше мелко нарезанные и высушенные) и экссудат из карбункула. Вскрывать категорически запрещено! (Почвенная инфекция, спора!) Если труп случайно вскрыт, то также посылают кусочки печени и селезенки, кровь сердца. Материал отбирают не позднее чем через 4 ч после гибели животного. В жаркое время года материал консервируют стерильным 30%-ным водным раствором глицерина.

Биопроба. Двум морским свинкам внутримышечно в область внутренней поверхности бедра или подкожно в область брюшных мышц вводят суспензию, приготовленную из патологического материала (по 0,5–1 мл). Гибель наступает через 16–72 ч с характерными патолого-анатомическими изменениями. На месте инъекции материала — мышцы темно-красного цвета, геморрагически инфильтрованы, иногда крепитируют (образование газа), кожа от пораженных мышц отделяется с трудом.

Возбудитель образует токсины, которые могут вызывать гибель лабораторных и домашних животных.

Патогенность. Возбудитель попадает в организм алиментарным путем с кормом, чаще в летнее время, когда животные находятся на пастбище, или заражение происходит через раны на поверхности тела. Возбудитель через пищеварительный тракт проникает в кровь, а затем поступает в мышцы и подкожную клетчатку, преимущественно в местах травмированной ткани. Здесь он усиленно размножается, выделяя токсины, некротические гемолизины и агрессины, которые подавляют защитные силы организма, нарушают целостность кровеносных сосудов, возникает отек и некроз тканей. Микробы продуцируют большое количество газов, вызывая крепитацию.

Антигенная структура. В составе антигенов Сl. chauvoei выделены термостабильный соматический О-антиген и термолабильный жгутиковый Н-антиген. Они обладают видовой специфичностью и являются общими у всех штаммов. Однако Н-антиген, выделенный от крупного рогатого скота и от овец, различен. Дифференцирован также споровый S-антиген. Он является общим с Cl. septicum, что приводит к перекрестной агглютинации этих двух клостридий.

Иммунитет. У крупного рогатого скота естественного иммунитета нет, но с возрастом снижается восприимчивость. После переболевания образуется длительный активный иммунитет.

Патологическая анатомия. Трупы обычно вздуты, но разлагаются медленно. Из носовых отверстий и ротовой полости вытекает пенистая жидкость. Наблюдается разлитая отечность в области задних конечностей (до скакательного сустава), промежности, спины, паха. При вскрытии трупа чувствуется запах прогорклого масла. Подкожная клетчатка в области пораженных мышц пронизана кровоизлияниями и пузырьками газа, в ней выявляют красный или желтый студенистый инфильтрат. Специфическими поражениями являются газовые отеки в мышцах. На разрезе мышцы пористые, сухие, темно-красного, почти черного цвета, при надавливании из них выделяется пенисто-кровянистая жидкость с запахом прогорклого масла. В грудной и брюшной полостях — скопление мутноватой жидкости темно-красного или коричневого цвета. Кровоизлияния на серозных и слизистых оболочках. Кровь свернувшаяся, темно-красного цвета. Отмечаются различные поражения паренхиматозных органов. Печень увеличена, с наличием некротических очажков. Иногда некротические очажки сливаются, в результате чего вся печень имеет губчатый вид вследствие образования газов. Селезенка дряблая, кровенаполненная (рис. 4.3.1 б, в, г).

Устойчивость. Микроб устойчив в споровой форме. В почве сохраняется до 25 лет, в гниющих мышцах — до 6 мес., в высушенных — до 18 лет. При соответствующих условиях в почве возбудитель может вегетировать и размножаться. В солонине сохраняется до 2 лет. Выдерживает кипячение в свежем мясе до 2 ч, при 110 °С — до 40 мин. 3%-ный раствор формалина разрушает его через 10–15 мин, 3%-ный фенол не действует на споры.

Рис. 4.3.1. Эмкар: а — возбудитель Сl. chauvoei — палочка с закругленными концами; б, в — мышцы на разрезе темно-красного, почти черного цвета с пузырьками газа; г — печень увеличена, с наличием некротических очажков

Лечение. В начальной стадии болезни эффективным могут оказаться антибиотики: ампициллин, бициллин, синулок, окситетрациклин и современные антибиотики цефалоспоринового ряда. Для лечения образовавшихся припухлостей можно вокруг них подкожно вводить дезинфицирующие средства: 2%-ный раствор перекиси водорода, 3–5%-ный раствор карболовой кислоты, 5%-ный раствор лизола, 0,1%-ный раствор марганцовокислого калия (также рекомендуется разрезать припухлости и промывать дезинфицирующими растворами). С целью дезинтоксикации организма животного внутривенно вводят 10–30%-ный раствор натрия тиосульфата или 40%-ный раствор гексаметилентетрамина. Дополнительно рекомендовано симптоматическое лечение.

Меры борьбы с инфекцией. Подозреваемых в заболевании животных изолируют и лечат, а остальных прививают независимо от сроков предыдущей вакцинации. В случае падежа трупы сжигают. Убой на мясо больного и подозрительного по заболеванию скота запрещается. Животных, переболевших эмфизематозным карбункулом, разрешается убивать на мясо не ранее чем через 30 дней со дня исчезновения клинических признаков болезни (хромота, отеки, крепитация). Молоко от иммунизированных коров используют без ограничений. Навоз, подстилку и остатки корма, загрязненные выделениями больных животных, перед удалением увлажняют 10%-ным горячим раствором гидроксида натрия, а затем сжигают.

Почву на месте падежа, вынужденного убоя или вскрытия трупа животного, павшего от эмфизематозного карбункула, обжигают, затем орошают раствором хлорной извести из расчета 10 л/м². Затем почву перекапывают на глубину 25 см, перемешивая с сухой хлорной известью, содержащей не менее 25% активного хлора, из расчета: на 3 части почвы 1 часть хлорной извести, и почву увлажняют водой. Хозяйство (ферму) объявляют благополучным и карантин снимают через 14 дней после выздоровления или падежа последнего больного животного и проведения заключительной дезинфекции.

Схема лабораторной диагностики и биопрепараты. См. приложения.

4.4. Возбудители злокачественного отека (газовая гангрена)

Злокачественный отек — остропротекающая неконтагиозная раневая инфекция, вызываемая группой патогенных клостридий. Заболевание, характеризующееся быстрым распространением болезненного отека мягких тканей, их разрушением (некрозом), скапливанием газов, интоксикацией всего организма (токсины всасываются в кровь, поражают центральную нервную систему, дыхательный центр, сердечно-сосудистую систему, и наступает смерть.

Заболевание регистрируется в виде спорадических случаев на фоне обширных и глубоко проникающих ранений, после тяжелых родов, абортов, ожогов и т. д. Болеют животные и человек.

Возбудители: в этиологии решающую роль играют следующие виды бактерий: Clostridium perfringens, Cl. septicum, Cl. novyi (oedematiens), Cl. histolyticum, которые могут вызывать злокачественный отек в разных сочетаниях (рис. 4.4.1).

Cl. septicum — полиморфная палочка. На препаратах из культур располагается в виде отдельных палочек, цепочек и нитей. На препаратах из патологического материала — в виде нитей. Грамположительный, перитрих. Образует споры в организме и во внешней среде.

Культуральные свойства. Строгий анаэроб. На среде Китта — Тароцци отмечается равномерное помутнение среды с интенсивным газообразованием. Затем образуется осадок, и среда просветляется. На глюкозо-кровяном агаре — колонии в виде выраженной зоны гемолиза.

Биохимические свойства. Ферментирует с образованием кислоты и газа: глюкозу, лактозу, галактозу, мальтозу, левулезу, салицин. Не образует индол. H₂S образует очень незначительно Продуцирует токсины, обладающие некротизирующим, летальным, гематоксическим действием.

Рис. 4.4.1. Клостридии, участвующие в этиологии злокачественного отека

Устойчивость. В почве может размножаться и сохраняться годами. Споры выдерживают кипячение до 15 мин. Патогенен для всех лабораторных животных, но в основном используют морских свинок (заражают подкожно или внутримышечно, погибают через 8–20 ч с признаками газового отека).

Cl. perfringens — распространен повсеместно, особенно в почве, богатой гумусом. Его резервуаром служат здоровые животные (размножается в желудочно-кишечном тракте и выделяется с фекалиями во внешнюю среду). Здесь быстро переходит в споровую форму и длительное время сохраняется. По морфологии — толстые палочки с закругленными концами. Но форма часто изменяется под влиянием факторов внешней среды: могут быть могут быть и нити, и коккоподобные, и удлиненные формы. Грамположительная, неподвижная. Во внешней среде образует спору, в организме — капсулу.

Культуральные свойства — нетребовательный анаэроб. На среде Китта — Тароцци наблюдается равномерное помутнение с умеренным газообразованием. Через 3–5 суток среда просветляется, образуется обильный осадок.

На глюкозо-кровяном агаре образует круглые, сочные, выпуклые, с ровными краями, зеленого цвета, с широкой зоной гемолиза колонии (иногда 2 зоны гемолиза). На молоке через 24 ч образуется приподнятый газом до пробки плотный губчатый сгусток. Молочная сыворотка прозрачная.

Биохимические свойства. Сбраживает с образованием кислоты и газа: глюкозу, лактозу, галактозу, мальтозу, сахарозу, левулезу, продуцирует сложный токсин, обладающий некротизирующим, летальным и гематоксическим действием.

Устойчивость. Споры устойчивы во внешней среде, способны выдерживать кипячение до 2–3 ч. В качестве объекта для биопробы заражают морских свинок, и через 12–24 ч наступает летальный исход с характерными патолого-анатомическими изменениями.

Cl. novyi (oedematiens) — крупная палочка с закругленными или обрубленными концами, располагается одиночно или в виде коротких цепочек. Во внешней среде образует споры, капсул не образует. Подвижные (в присутствии кислорода подвижность теряется). Перитрих. В молодых культурах грамположительная, в старых грамотрицательная.

Культуральные свойства — строгий анаэроб! На среде Китта — Тароцци вызывает сплошное помутнение, слабое газообразование с последующим просветлением среды и выпадением хлопьевидного осадка. На глюкозо-кровяном агаре образует шероховатые колонии с неровными краями в виде бахромки с небольшой зоной гемолиза. Молоко свертывает с образованием мелких хлопьев казеина.

Биохимические свойства выражены слабо. Ферментирует с образованием кислоты и газа: глюкозу, глицерин. H₂S, индол не образует. Выделяет токсин, обладающий некротизирующим, гемолитическим и летальным действием.

Устойчивость — вегетативные формы не установлены. Споры могут сохраняться в почве до 8 лет, выдерживают кипячение 1–2 ч. Из лабораторных животных исключительно восприимчивы морские свинки.

Cl. histoliticum (от греч. «растворяющий ткани»). Продуцирует протеолитический фермент, обуславливающий расплавление тканей. Является естественным обитателем кишечника человека и животных. По морфологии значительно меньше размерами по сравнению с вышеописанными. Грамположительная, образует во внешней среде споры, капсулу не образует, перитрих.

Культуральные свойства — нестрогий анаэроб. На среде Китта — Тароцци растет без газообразования в виде равномерного помутнения с последующим образованием осадка и просветлением среды. На глюкозо-кровяном агаре образует мелкие блестящие в виде капелек росы колонии с ровными краями и узкой зоной гемолиза (часто и без гемолиза).

Биохимические свойства. Сахаролитические свойства не выражены. В значительном количестве образует Н₂S.

Устойчивость — почти такая же, как и у всех вышеописанных. Кипячение выдерживают споры в течение 1 ч. Вырабатывает токсины, обладающие летальным и некротизирующим действием.

Диагностика. В лабораторию на злокачественный отек посылают тканевой экссудат, кусочки пораженных мышц, тканей, паренхиматозные органы. Лабораторная диагностика включает:

1) бактериоскопию (наличие большего количества грамположительных палочек служит ориентировочным признаком);

2) посев на специальные питательные среды;

3) биохимические исследования;

4) биопробу;

5) реакция нейтрализации (РН).

Специфическая профилактика злокачественного отека — в связи с полиэтиологичностью, спорадичностью и острым течением активная профилактика не нашла применения. Для лечения и при угрозе заражения применяется поливалентная антитоксическая сыворотка, а также антибиотики широкого спектра и пролонгированного действия. Необходима ранняя хирургическая обработка очага поражения (растворы КMnO₄, H₂O₂, хлорамина и присыпка сульфаниламидными препаратами и антибиотиками широкого спектра действия).

4.5. Возбудители анаэробной энтеротоксемии

4.5.1. Анаэробная энтеротоксемия крупного рогатого скота

Анаэробная энтеротоксемия крупного рогатого скота — остропротекающая токсикоинфекция, характеризующаяся геморрагическим энтеритом, общей токсемией и высокой летальностью.

Заболевание впервые было описано в Австралии (Роуз, Эдгар, 1936). Затем эту болезнь выявили во Франции и США. Заболевание периодически встречается во многих странах, причиняя ущерб животноводству в результате гибели молодняка.

Возбудитель болезни — С. perfringens типов В, С, D, редко А. Крупная, толстая, палочковидная грамотрицательная бактерия с закругленными концами. Жгутиков не имеет, неподвижна. В организме животных и на сывороточных средах образует капсулы, во внешней среде и на щелочных безуглеводных средах образует центральные или субтерминальные споры. Возбудитель выделяет токсины. В споровой форме сохраняется в почве до 4 лет, на сухих поверхностях — до 2 лет. Споры выдерживают кипячение в течение 5–15 мин, прогревание при 90 °С — 30 мин. Вегетативные формы микроба сохраняются в почве до 35 суток, в навозе — до 5 суток. При температуре 80 °С погибают в течение 5 мин. Дезинфицирующие средства: 10%-ный раствор горячего гидроксида натрия и 1%-ная серно-карболовая смесь, раствор хлорной извести, содержащий 5% активного хлора, 5%-ный раствор формалина убивают возбудитель через 15–20 мин.

C. perfringens различных типов содержит следующие токсические субстанции: А (α), В (α, β, έ), С (а, β), D (α, έ), Е (α, ί):

α-токсин (альфа-токсин) — лецитиназа (фосфолипаза), разрушает мембрану клеток, вызывает на кровяном агаре зону неполного гемолиза;

β-токсин (бета-токсин) обладает летальным и некротизирующим действием, легко разрушается;

έ-токсин (эпсилон-токсин) выделяется как протоксин, активизируется в кишечнике под влиянием протеаз;

ί-токсин (йота-токсин) выделяется как протоксин, активизируется трипсином, обладает летальным и некротизирующим действием.

Эпизоотология. Наиболее восприимчивы новорожденные телята. Возникновению болезни способствует нарушение условий содержания и кормления. Энтеротоксемия у телят, вызванная типом А, может возникать без заноса инфекции извне. Типы С и D обычно служат причиной болезни у телят более старшего возраста (6–24 мес.), находящихся на пастбищном содержании или на откорме с высоким соотношением концентратов в рационе. Возникновению болезни у них способствует нарушение естественного микробиоценоза кишечника, связанное с внезапной сменой рациона, перекармливанием и несоблюдением зоогигиенических условий содержания животных. Болезнь чаще регистрируют ранней весной, в начале роста трав, чему способствует поедание травы вместе с инфицированной землей. Источник возбудителя инфекции — больные животные и бациллоносители, которые контаминируют почву, подстилку, предметы ухода. Заражение происходит алиментарным путем. Болезнь протекает спорадически, вначале возникают единичные случаи болезни, затем число больных увеличивается.

Патогенез. Болезнь развивается при поступлении в организм токсигенного штамма возбудителя или как эндогенная инфекция. Возбудитель, попадая в желудочно-кишечный тракт, усиленно размножается и продуцирует токсины, которые воздействуют на слизистую оболочку тонкого и толстого кишечника, вызывают воспаления, язвы, некротические изменения, нарушают секреторную и моторную функции пищеварительного тракта.

Токсины проникают в кровь, воздействуют на эндотелий сосудов, слизистые и серозные оболочки, внутренние органы, вызывают множественные кровоизлияния, разрушают паренхиму почек, печени, других органов. Животные гибнут от интоксикации.

Течение и клиническое проявление. У телят в возрасте от 1–5 дней до 3 недель болезнь протекает остро, иногда гибель наступает через 3–4 ч после появления первых симптомов (повышение температуры тела, учащение пульса и дыхания, отказ от корма, вялость, острые колики, нарушения со стороны нервной системы). У отдельных телят регистрируют кровотечение из естественных отверстий, диарею с примесью крови, кал вначале желто-зеленого цвета, содержит пузырьки газа, а затем становится буро-коричневым. В области подчелюстного пространства, шеи, подгрудка, живота, спины, конечностей заметны инфильтраты в подкожной клетчатке. Животное погибает в коматозном состоянии. Иногда телята выздоравливают, но отстают в росте и развитии.

У крупного рогатого скота на откорме анаэробная энтеротоксемия имеет три формы. Первая и наиболее часто встречающаяся характеризуется внезапной гибелью животного без каких-либо признаков развития заболевания. В тех случаях, когда болезнь проявляется клинически, характерными признаками являются внезапная потеря координации движений и состояние прострации. Отмечаются конвульсии, мышечные спазмы ушей и глаз. При второй форме болезни температура тела незначительно повышается и развивается паралич тазовых конечностей. Летальный исход наступает в течение 8–12 ч. Для третьей формы характерны коматозное состояние и прострация в самом начале болезни. Тактильные и слуховые раздражители вызывают конвульсии и опистотонус. Смерть, как правило, наступает через неделю. При всех клинических формах выявляют гипергликемию и гликозурию. Заболевание может возникать спорадически, но в некоторых стадах в течение короткого периода времени заболеваемость может достигать 5–10%. Летальность достигает 100%.

Патолого-анатомические изменения. Трупы вздуты и быстро разлагаются. Отмечают пенистые и кровянистые выделения из ротовой и носовой полостей. Видимые слизистые оболочки анемичные. На серозных оболочках, эндокарде левого желудочка, эпикарде и тимусе обнаруживают множественные точечные и пятнистые кровоизлияния. Возможен отек мозга. Основные изменения отмечают в брюшной полости, и зависят они от типа возбудителя, вызвавшего болезнь.

Для энтеротоксемии телят, обусловленной С. perfringens типа А, характерна анемичность подкожной клетчатки. В брюшной полости скапливается кровянистая жидкость. Слизистая оболочка тонкого отдела кишечника катарально воспалена, местами обнаруживают кровоизлияния. Мезентериальные лимфатические узлы отечные, увеличенные. Печень кровенаполненная, увеличенная в объеме, дряблая. Легкие отечные, на эпикарде точечные кровоизлияния. В грудной полости присутствует жидкость красноватого цвета. Отмечается склонность к постоянным обильным кровотечениям, только у одних животных кровь выходит через естественные отверстия (рот, нос, анус), у других — в подкожную клетчатку и полости организма.

При энтеротоксемии, обусловленной типами В и С, обнаруживают множественные кровоизлияния в паренхиматозных органах, геморрагическое воспаление тонкой и подвздошной кишки с некрозами. Содержимое кишечника кровянистое. В почках и печени множественные петехии. В брюшной и грудной полостях скапливается избыточное количество жидкости красного цвета.

При болезни, обусловленной типом D, в основном отмечают катаральное воспаление кишечника с полосчатыми кровоизлияниями или без них. В редких случаях возможно размягчение почек. Наиболее выражены такие изменения, как значительная инъецированность кровеносных сосудов, отечность и увеличение брыжеечных лимфатических узлов, избыточное количество жидкости в брюшной и грудной полостях, дряблость и кровенаполненность печени, точечные кровоизлияния на сердце.

Диагностика и дифференциальная диагностика. Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинической картины, патолого-анатомических изменений и лабораторных исследований. Решающее значение при постановке диагноза имеют обнаружение токсина в кишечном содержимом и его типизация.

Дифференцировать анаэробную энтеротоксемию телят необходимо от диспепсии, эшерихиоза, сальмонеллеза, диплококковой инфекции, вирусной диареи, а у взрослых животных — от сибирской язвы, эмфизематозного карбункула, пастереллеза и отравлений.

Иммунитет и специфическая профилактика. Животные, переболевшие анаэробной энтеротоксемией, приобретают иммунитет, напряженность и длительность которого зависят от силы и тяжести перенесенной болезни.

Для создания иммунитета у животных используют концентрированную поливалентную гидроокисьалюминиевую вакцину против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отека овец и дизентерии ягнят или поливалентный анатоксин против клостридиозов овец.

Профилактика. Мероприятия по профилактике болезни должны складываться из тщательного соблюдения зоогигиенических и ветеринарно-санитарных правил содержания и кормления животных. В неблагополучных хозяйствах проводят профилактическую и вынужденную вакцинацию. Чтобы обеспечить колостральный иммунитет у телят, прививают стельных коров двух- или трехкратно с таким расчетом, чтобы завершить иммунизацию за 20–30 дней до отела.

Лечение анаэробной энтеротоксемии крупного рогатого скота. Больных и подозрительных по заболеванию животных изолируют и лечат. Положительный эффект на ранней стадии болезни дает антитоксическая сыворотка в сочетании с медикаментозными средствами — антибиотиками или сульфаниламидными препаратами.

Для лечения больных анаэробной энтеротоксемией рекомендуется также применять средства, регулирующие функцию желудочно-кишечного тракта: желудочный сок, АБК, ПАБК, ацидофильную простоквашу, подкисление выпаиваемой воды и молока соляной кислотой и т. д.

Меры борьбы. При появлении болезни в хозяйстве, на ферме больных изолируют и лечат. Здоровых животных, содержавшихся вместе с больными, и весь нарождающийся молодняк с профилактической целью обрабатывают антитоксической сывороткой. Одновременно применяют антибиотики.

Наряду с этим проводят мероприятия по недопущению распространения возбудителя во внешней среде: за больными животными закрепляют отдельный обслуживающий персонал, регулярно проводят дезинфекцию помещений и предметов ухода.

4.5.2. Анаэробная энтеротоксемия свиней

Анаэробная энтеротоксемия свиней — остропротекающая токсикоинфекция преимущественно новорожденных поросят, характеризующаяся геморрагическим воспалением кишечника, диареей, явлениями токсикоза и высокой летальностью.

Историческая справка, распространение, степень опасности и ущерб. Энтериты поросят анаэробной этиологии впервые описаны в Венгрии Детре (1927). В России энтеротоксемию поросят впервые изучал С. Т. Щенников (1946), который описал массовые остропротекающие кровавые поносы у новорожденных поросят, вызванные С. perfringens. Энтеротоксемия поросят встречается во многих странах и в неблагополучных хозяйствах причиняет большой ущерб вследствие массовой гибели новорожденных животных.

Возбудитель болезни. Возбудителем энтеротоксемии у поросят является С. perfringens типа С. Другие типы значения практически не имеют.

Эпизоотология. Заболеванию анаэробной энтеротоксемией чаще подвержены поросята в первые дни жизни (новорожденные), реже в более старшем возрасте. Важным моментом в возникновении заболевания являются ослабленная резистентность организма, недостаток молозива и низкое его качество, нарушение санитарного режима в свиноводстве и др. Болезнь может возникнуть внутри хозяйства при наличии благоприятных условий для развития возбудителя в организме животных или появиться в результате заноса высоковирулентных штаммов извне. Источником инфекции служат больные поросята и свиноматки — клостридионосители, выделяющие возбудитель и инфицирующие окружающую среду.

Заражаются поросята алиментарным путем при пользовании общими кормушками и автопоилками. В инфицировании новорожденных большую роль играет загрязнение вымени и сосков свиноматок экскрементами больных животных. Кроме того, на свинокомплексах накоплению С. perfringens типа С и возникновению болезни способствуют групповое содержание супоросных свиноматок с одновременным опоросом большого числа животных и передача возбудителя по ходу технологического процесса.

На свиноводческих комплексах болезнь возникает в любое время года, чаще в зимне-весенний период, протекает в виде эпизоотических вспышек с охватом большого поголовья поросят на разных технологических циклах.

Патогенез. Изучен недостаточно. Возбудитель, попадая в желудочно-кишечный тракт, размножается в тонком отделе кишечника (тощая кишка) и продуцирует токсины, которые воздействуют на слизистую оболочку тонкого и толстого отделов кишечника, что обуславливает развитие клинических признаков болезни и характерных патолого-анатомических изменений.

Течение и клиническое проявление. Инкубационный период болезни длится от нескольких часов до нескольких дней. Заболевание отмечается даже в первые часы после рождения. Болезнь протекает остро и подостро. При сверхостром течении поросята погибают без видимых признаков заболевания. При остром течении основным проявлением служит кровавая диарея, больные поросята быстро погибают. В случаях подострого течения болезни животные могут выздороветь. На промышленных комплексах, а также в крупных свиноводческих хозяйствах анаэробная энтеротоксемия у новорожденных поросят часто протекает в ассоциации с эшерихиозом, в группе доращивания — с сальмонеллезом и дизентерией.

Патолого-анатомические признаки. Трупы павших животных вздуты и быстро разлагаются. Отмечают пенистые и кровянистые истечения из ротовой и носовой полостей. Глаза запавшие, слизистая оболочка бледная. Наиболее характерные изменения находят в тонком отделе кишечника, особенно в тощей кишке. У одних поросят весь кишечник геморрагически воспален, темно-красного цвета и наполнен кровянистым содержимым, у других воспалены лишь отдельные отрезки кишечника с преимущественной локализацией изменений в тощей кишке. Кишечная стенка местами с некрозами, покрыта язвами. Содержимое кишечника кровянистое, с пузырьками газа, желудок наполнен сгустками молока, слизистая оболочка его гиперемирована или геморрагически воспалена. В брюшной полости признаки серозно-фибринозного перитонита. Мезентериальные лимфатические узлы увеличены, гиперемированы. На поверхности почек и под эпикардом обнаруживают точечные кровоизлияния. Поражения паренхиматозных органов сходны с таковыми при энтеротоксемии у животных других видов.

Диагностика и дифференциальная диагностика. Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинической картины, патолого-анатомических изменений и результатов лабораторных исследований. Окончательный диагноз ставят на основании обнаружения токсина С. perfringens, чаще типа С, в содержимом тонкого отдела кишечника и выделения культуры данного возбудителя аналогично исследованиям по инфекционной энтеротоксемии овец.

При дифференциальной диагностике необходимо исключать эшерихиоз, сальмонеллез, вирусный гастроэнтерит, дизентерию, кормовые токсикозы.

Иммунитет, специфическая профилактика. Животные, переболевшие анаэробной энтеротоксемией, приобретают стойкий иммунитет. Для специфической профилактики энтеротоксемии у новорожденных поросят проводят двукратную иммунизацию свиноматок анатоксин-вакциной С. perfringens типа С.

Профилактика. Особое внимание обращают на условия содержания и кормления супоросных маток, особенно во второй половине супоросности. Проводят вакцинацию свиноматок в последний период супоросности (65 и 90 дней) с интервалом 20–25 дней. Для профилактики вспышек анаэробной дизентерии в группе доращивания поросят иммунизируют в возрасте 15 и 40 дней двукратно, с интервалом 20–25 дней.

Лечение. Лечение животных, как правило, не дает желательного результата из-за возникновения необратимых изменений в органах и тканях, вызванных большим количеством токсина. В стационарно неблагополучных хозяйствах поросятам в первые часы жизни рекомендуется применять антитоксическую сыворотку против анаэробных инфекций и антибиотики. При необходимости через 2–3 дня введение сыворотки и антибиотиков необходимо повторить.

Меры борьбы. В хозяйствах, неблагополучных по анаэробной энтеротоксемии поросят, применяют анатоксин-вакцину или ассоциированную вакцину против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиоза поросят. Вакцину вводят свиноматкам двукратно, заканчивая вакцинацию за 30–35 дней до опороса. После приема поросятами молозива у них формируется колостральный иммунитет продолжительностью до 1,5 мес.

Необходимо строго соблюдать санитарный режим в свиноводстве: «все занято — все свободно», одновременный вывод свинопоголовья, подготовка помещений к приему животных, тщательная очистка от навоза и дезинфекция.

4.5.3. Анаэробная дизентерия ягнят

Анаэробная дизентерия ягнят — острая токсикоинфекция ягнят первых дней жизни, сопровождающаяся общей токсемией, диареей, быстрым обезвоживанием организма, острым катарально-геморрагическим и геморрагически-язвенным энтеритом и быстрой гибелью животных.

Историческая справка. В России массовые заболевания ягнят поносами, наблюдавшиеся в крупных овцеводческих хозяйствах, впервые были описаны в конце 19 в. под названием «повальный понос ягнят». Так, П. Н. Кулешов, П. Никольский дизентерию ягнят как кровавый понос описали в1885 г. Описанное ими заболевание повторялось ежегодно в течение ряда лет в период массового ягнения, когда из 100 ягнят, рождавшихся ежедневно в период массового ягнения, поносом заболевало около 70; от 30 до 50 из них погибало. Деллинг и Гайгер (1922) при изучении этиологии выделили возбудителя и дали название болезни. Дизентерия ягнят широко распространена, большей частью в местах разведения овец тонкорунных пород, и наносит экономический ущерб из-за падежа ягнят.

Этиология. Возбудитель Cl. рerfringens типа В — неподвижная, короткая, толстая палочка с обрубленными или слегка закругленными концами, длиной 4–6 мкм и шириной 1,5 мкм. В мазках палочки обычно располагаются одиночно, попарно, иногда в виде цепочки. Cl. perfringens хорошо окрашивается всеми анилиновыми красками, причем в мазках из молодых культур по Граму красится положительно, из старых — слабо или отрицательно. Cl. рerfringens в организме образует капсулу, во внешней среде спору, которые располагаются центрально или субтерминально.

Споровые формы микроба в почве сохраняют свою жизнеспособность до четырех лет, выдерживают кипячение в течение 5–10 мин, температуру 90 °С — 30 мин. В навозе сохраняется в течение 3–5 дней. Креолин 5% убивает микроб менее чем за 3 мин, известковое молоко (10–20%), 1–2%-ный раствор едкого натрия и 3%-ный лизол уничтожают возбудителя в течение одной минуты, 2–3%-ная карболовая кислота и 96-градусный спирт — в течение 3 мин.

Эпизоотологические данные. Заболевание появляется в период массового ягнения, который в овцеводческих хозяйствах обычно совпадает с началом весны. Начинается обычно с единичных случаев; постепенно количество больных нарастает, достигая максимума к 10 или 15-му дню со времени появления первых случаев заболевания. Дизентерия в большинстве случаев поражает ягнят в возрасте 1–5 дней. Заболевание ягнят старше шестидневного возраста встречается значительно реже. Повторяясь ежегодно в неблагополучных хозяйствах, дизентерия ягнят может вызывать в разные годы то единичные, то массовые заболевания.

Источником инфекции являются:

• больные животные, выделяющие возбудителя с калом;

• здоровые взрослые овцы — носители инфекции, в кишечнике у которых возбудитель размножается и периодически выделяется во внешнею среду с фекалиями, загрязняя территорию овчарен, подстилку, инвентарь и все предметы, с которыми соприкасаются новорожденные ягнята.

Споры могут длительное время сохраняться в почве, что определяет стационарность (энзоотичность) анаэробной дизентерии. Заболевание неконтагиозное.

Заражение ягнят происходит алиментарным путем при:

• сосании вымени кормящих овец, загрязненного инфицированным навозом и экскрементами;

• облизывании инфицированных объектов в кошаре (кормушка, подстилка, инвентарь и т. д.);

• большую опасность представляют неубранные трупы павших ягнят, оставленные непродезинфицированные места, где они лежали.

Причины возникновения анаэробной дизентерии ягнят:

• неполный охват вакцинацией всего поголовья овцематок;

• снижение активности формирования колострального иммунитета вследствие низкой упитанности суягных овцематок.

В зависимости от факторов, способствующих возникновению заболевания, в одних овцеводческих хозяйствах оно регистрируется ежегодно, в других может не встречаться в течение ряда лет.

Массовое заболевание ягнят анаэробной дизентерией обусловлено факторами, ослабляющими устойчивость организма. Важнейшими из них являются неправильное кормление и нарушение температурного режима.

Нерациональное и недостаточное кормление овцематок в период суягности часто является причиной врожденной слабости новорожденных. Это говорит о том, что в период формирования плода организм овцематки должен быть обеспечен необходимым количеством белков, углеводов, жиров, минеральных веществ и витаминов, от чего зависит устойчивость новорожденного ягненка.

Охлаждение новорожденных ягнят — одно из важнейших условий, способствующих возникновению дизентерии у ягнят. Охлаждение организма вызывает ряд патологических изменений в крови, эндотелии сосудов и в различных органах и тканях. В результате разрушения форменных элементов крови и ее свертывания происходит закупорка мелких сосудов, что влечет за собой ухудшение снабжения кровью того или иного участка органа. Этим создается благоприятная почва для размножения в пораженных участках проникших микробов, вызывающих заболевание.

При охлаждении резко нарушается внутритканевой обмен, ослабляются иммунобиологические защитные приспособления организма.

К факторам, способствующим возникновению заболевания, следует отнести неудовлетворительные условия содержания ягнят и тесноту в кошарах.

В неблагополучных хозяйствах заболеваемость ягнят анаэробной дизентерией колеблется из года в год от единичных случаев до 14–29% ягнят, летальность может достигать 100%.

Патогенез. Заболевание развивается по типу кишечной интоксикации. В организм новорожденных ягнят возбудитель проникает через загрязненные соски матери. Попав в кишечник, возбудитель начинает размножаться, выделяя при этом специфический токсин (в основном β-токсин), который приводит к некротическим изменениям слизистой оболочки, вплоть до образования язв, и в большом количестве всасывается в кровь, поражая практически все органы. Всасываясь через поврежденную кишечную стенку, токсины и продукты некротического распада слизистой оболочки отравляют организм ягненка, вызывая синдром острого токсикоза. Дистрофические процессы и расстройства кровообращения в паренхиматозных органах также являются следствием токсикоза.

Клинические признаки. Дизентерия поражает ягнят в большинстве случаев в первые 3 дня после рождения. Реже наблюдаются случаи заболевания ягнят на 5–6 день. Инкубационный период не превышает 5–6 ч.

Течение болезни может быть сверхострым, острым, подострым и изредка хроническим.

При сверхостром течении ягнята погибают внезапно, без достаточно выраженных клинических признаков болезни. При этом у больных ягнят появляются признаки поражения нервной системы: судороги, нарушение координации движений. У отдельных больных ягнят незадолго до смерти фекалии становятся жидкими и кровянистыми. При остром течении заболевания у больных ягнят отмечаем угнетенное состояние, появляется понос, фекалии с примесью крови и пузырьков газа. Фекалии в дальнейшем становятся густыми, темными, с примесью слизи. Такой больной ягненок стоит согнувшись, с взъерошенной шерстью, втянутым животом и слабо реагирует на окружающее. Шерсть вокруг анального отверстия и на хвосте запачкана испражнениями, склеена. Иногда в начале заболевания бывает повышение температуры тела до 40–43 °С. Дыхание и пульс у ягнят учащены. Болезнь длится от нескольких часов до 1–3 дней.

При подостром течении анаэробной дизентерии болезнь принимает затяжной характер с менее выраженными признаками. У отдельных ягнят болезнь может продолжатся до 3 недель. При клиническом обследовании больной ягненок лежит в состоянии прострации, истощен. Испражнения вначале жидкие, желтого или зеленого цвета, впоследствии становятся более густыми, черного цвета, с примесью крови, пузырьков газа и слизи. Больные ягнята тужатся, позвоночник при этом выгнут, живот втянут, шерсть взъерошена. Ягнята угнетены, отказываются сосать молоко, часто залеживаются. Дыхание и пульс у ягнят учащены. Температура тела в начале болезни у отдельных ягнят может повышаться до 42 °С. В дальнейшем отмечаем истощение и гибель.

В редких случаях болезнь может принимать хроническое течение, при котором ягнята медленно выздоравливают, отставая в росте и развитии. Впоследствии иногда наступает падеж от осложнений в связи с изъязвлениями кишечника.

Патолого-анатомические изменения. Упитанность трупа ниже средней. Волосяной покров в области ягодиц и хвоста запачкан жидкими каловыми массами. Видимые слизистые оболочки анемичны. Поверхностные лимфатические узлы слегка набухшие. В брюшной, грудной и перикардиальной полостях — скопление небольшого количества светлого серозного, иногда красноватого транссудата.

В тонком кишечнике серозная оболочка диффузно или очагово покрасневшая, местами покрыта легко снимающимися серовато-желтоватыми пленками фибрина. Слизистая оболочка тонкого кишечника, особенно подвздошной кишки, на протяжении всей длины или отдельных ее отрезков набухшая, отечная, покрасневшая, местами изъязвлена. Края язв бахромчатые. Дно ярко- или темно-красного цвета. Брыжеечные и портальные лимфатические узлы резко увеличены, на разрезе сочные, темно-красного цвета, пронизаны кровоизлияниями (картина острого серозно-геморрагического лимфаденита. Ткань брыжейки инфильтрирована серозным экссудатом.

Селезенка без видимых изменений, иногда отмечают слабое ее набухание. Печень дряблой консистенции, несколько увеличена, неравномерно окрашена: участки темно-красного чередуются с участками светло-серого или серовато-желтоватого цвета, на фоне которых хорошо заметны мелкие кровоизлияния (острая застойная гиперемия, зернистая и жировая дистрофия). В почках явления застойной гиперемии, зернистой и, реже, жировой дистрофии. Сердце несколько расширено за счет правого отдела, сердечная мышца дряблая, серо-красного цвета, иногда с желтоватым оттенком. Легкие отечны, в состоянии острой застойной гиперемии.

Диагноз на анаэробную дизентерию основан на анализе эпизоотологических, клинических данных, патолого-анатомических изменений, наличии у павших ягнят геморрагического энтерита или некротических язв на стенке кишечника и результатах лабораторного исследования. В лабораторию посылают свежий труп (не позднее 3 ч после падежа) или свежие участки пораженного кишечника с содержимым, кровь из сердца и кусочки паренхиматозных органов. Анаэробную дизентерию ягнят необходимо дифференцировать от сальмонеллеза, кокцидиоза и эшерихиоза ягнят.

Иммунитет при анаэробной дизентерии формируется антитоксический. Переболевшие животные приобретают стойкую невосприимчивость к повторному заражению. У ягнят, полученных от вакцинированных овцематок, формируется колостральный иммунитет, который продолжается до 2 мес.

Профилактика. Суягным овцематкам, особенно в последней трети суягности, когда происходит наиболее интенсивный рост плода, необходимо обеспечить полноценное кормление. В помещении кошары строго соблюдать ветеринарно-санитарные параметры, не допуская сырости, сквозняков и грязи. Помещения для зимнего содержания овец и проведения ягнения должны быть утеплены. При отсутствии утепленных овчарен необходимо иметь специальное помещение — тепляк, куда переводят на первое время после ягнения маток с приплодом. Перед постановкой овец на стойловое содержание помещения следует тщательно очистить и продезинфицировать. Объягнившихся овец и новорожденных ягнят необходимо размещать отдельно небольшими группами, не допуская скученности.

Овчарни должны иметь достаточную световую площадь и быть оборудованы вентиляцией. На зимний период при овчарне должен быть необходимый запас подстилки, используемый для суягных и подсосных маток. За 2–3 недели до начала ягнения овчарни следует очистить от навоза и тщательно продезинфицировать.

Для специфической профилактики ягнят овцематок вакцинируют перед окотом. Для этого применяют поливалентную концентрированную гидроокисьалюминиевую вакцину или поливалентный анатоксин против клостридиозов овец.

Для пассивной иммунизации применяют антитоксическую сыворотку против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец.

Лечение. Лечение анаэробной дизентерии эффективно только в начале заболевания. При появлении дизентерии заболевших ягнят вместе с овцематками изолируют и подвергают лечению антитоксической сывороткой против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец. Сыворотку можно применять вместе с антибиотиками тетрациклинового ряда.

Меры борьбы. В стационарно неблагополучных по анаэробной дизентерии хозяйствах вакцинации подлежит все овцепоголовье, начиная с трехмесячного возраста, согласно Наставления по применению вакцины или полианатоксина. В хозяйствах, неблагополучных по дизентерии ягнят и злокачественному отеку овец, профилактическую вакцинацию суягных маток проводят за 1–3 мес. до начала окота. По достижении шестимесячного возраста ягнят ревакцинируют двухкратно в дозах, предусмотренных для взрослых овец. Вынужденную вакцинацию в случае появления заболевания среди невакцинированного поголовья овец проводят в любые сроки. Во время вакцинации кастрация и стрижка овец запрещена. В стационарно неблагополучных по анаэробной дизентерии ягнят хозяйствах всем родившимся ягнятам вводят антитоксическую сыворотку.

Схема лабораторной диагностики и биопрепараты. См. приложения.

Глава 5. ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫЕ ПАЛОЧКИ, НЕ ОБРАЗУЮЩИЕ СПОР

5.1. Возбудители бруцеллеза

Бруцеллез — хроническая инфекционная болезнь, проявляющаяся абортами, рождением мертвого или нежизнеспособного плода, задержанием последа, эндометритами и расстройством воспроизводительной функции животных. Восприимчивы многие виды сельскохозяйственных животных и человек. Заражение поголовья благополучных по бруцеллезу стад или групп обычно происходит при введении в них больных животных.

Возбудитель выделен Д. Брюсом в 1886 г. Из отечественных ученых первые исследования бруцеллеза проводились академиком С. Н. Вышелесским (рис. 5.1.1).

Рис. 5.1.1. Д. Брюс и С. Н. Вышелесский

Возбудители — бактерии рода Brucella: Вr. melitensis (три биовара) — возбудитель бруцеллеза мелкого рогатого скота и человека; Вr. abortus (девять биоваров) — возбудитель бруцеллеза крупного рогатого скота; Вr. suis (четыре биовара) — возбудитель бруцеллеза свиней, а также северных оленей и зайцев. Есть пятый биовар — Вr. Suis — патогенный для мышей и других грызунов. В. ovis — возбудитель бруцеллеза овец; Вr. canis — возбудитель бруцеллеза собак;